发明名称 |
家兔血管内皮细胞RNA提取与纯化 |
摘要 |
本发明公开了一种家兔血管内皮细胞RNA提取方法,包括从左冠状动脉前降支、右冠状动脉、主动脉弓外环、主动脉弓内环、胸主动脉、腹主动脉、髂动脉提取RNA。本发明的方法提取率高,提取的RNA纯度高,可以满足检测几十种基因的需要。 |
申请公布号 |
CN103451177A |
申请公布日期 |
2013.12.18 |
申请号 |
CN201210289050.7 |
申请日期 |
2012.08.15 |
申请人 |
河南大学 |
发明人 |
姬新颖;李涛;王芳芳;朱诗白;万振;朱玉楠;刘瑞敏;张军;白慧玲;刘广超;马远方 |
分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种家兔血管内皮细胞RNA提取方法,其特征在于包括如下步骤:按无菌操作原则,打开家兔胸、腹腔,分离心脏、主动脉、髂动脉等大血管,剪断位于心脏上方的颈总动脉、上腔静脉肺静脉和肺动脉,家兔因血液流出过多而死亡,迅速手术操作,以便获取7种所需要的血管标本:左冠状动脉前降支、右冠状动脉、主动脉弓外环、主动脉弓内环、胸主动脉、腹主动脉、髂动脉;左、右冠状动脉:将心脏一分为二,左半侧有左冠状动脉前降支,右半侧有右冠状动脉,在动脉开口处的下方,水平剪开,用吸头的顶部连接27#针头和注射器,将血管用PBS溶液冲洗3次,从冠状动脉的上部开口处,加入Trizol溶液,用无菌离心管收集流出物,置于冰上;主动脉弓:将主动脉弯曲部分剪下,用PBS冲洗3次,去掉血块,从中线处剪开为外环和内环将内,外环放入培养皿中,顺着血管弯曲的走向分别加入Trizol溶液,冲洗3次,流出物分装入2个无菌离心管中,置于冰上;胸、腹主动脉:隔肌以上为胸主动脉,隔肌以下为腹主动脉,分别用PBS冲洗3次,去掉血块,加入Trizol溶液冲洗2次,流出物分装入2个无菌离心管中,置于冰上;髂动脉:从腹主动脉与髂动脉分叉处剪断,用PBS冲洗3次,去掉血块,加入Trizol溶液冲洗2次,流出物装入2个无菌离心管中,置于冰上;在上述分离到的样品内分别加入氯仿,混匀,室温存放3‑5分钟,2‑6℃离心13‑17min,上清液中加入等体积的75%乙醇,混匀后分别加入到质粒提取柱上,按质粒纯化步骤进行即得RNA。 |
地址 |
475004 河南省开封市金明大道北段河大新区 |