一种化学-生物酶法组合制备2′-脱氧尿苷的方法

摘要

本发明提供了一种化学-生物酶法组合制备2′-脱氧尿苷的方法，该方法采用“结晶诱导不对称转化”技术合成得到了单一α构型的核苷类药物中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸，再利用这个中间体为底物，加入尿嘧啶，在尿苷磷酸化酶的作用下生物转化合成得到2′-脱氧尿苷。本发明化学-生物组合技术的应用，结合了化学法与生物法的优点，避免了各自的缺陷，收率高，适用于工业化生产，其中采用“结晶诱导不对称转化技术”可以得到供应充足，构型单一的2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸中间体，无需再进行分离纯化；生物转化过程采用高效、专一的尿苷磷酸化酶催化一步完成，其专一性强，转化率高，条件温和，环境友好。

主权项

一种化学‑生物酶法组合制备2′‑脱氧尿苷的方法，所述方法包括：（1）以α/β混合构型的3′5′‑O‑二对氯苯甲酰基‑2‑脱氧‑D‑核糖‑1‑氯化物为原料，加入磷酸和4A分子筛，以正三丁基胺为催化剂，乙腈为反应溶剂，‑10～0℃于氮气保护下反应16～24小时；所述3′5′‑O‑二对氯苯甲酰基‑2‑脱氧‑D‑核糖‑1‑氯化物与正三丁基胺的摩尔用量之比为1：2～6；（2）步骤（1）反应结束后，过滤除去分子筛，滤液蒸干得到糖浆状物质用四甲基二戊酮溶解后，水洗，取有机相在‑15℃～10℃下加入环己胺搅拌反应至析出白色沉淀，过滤，滤饼依次用四甲基二戊酮和丙酮洗涤，真空干燥得到3,5‑O‑二（4‑苯甲酰氯）‑2‑脱氧‑α‑D‑核糖‑1‑磷酸二环己基胺盐；（3）3,5‑O‑二（4‑苯甲酰氯）‑2‑脱氧‑α‑D‑核糖‑1‑磷酸二环己基胺盐在弱碱溶液中于25℃～100℃下搅拌反应12h～72h脱除保护基，反应液浓缩、乙醇洗涤，真空干燥得到2‑脱氧‑α‑D‑核糖‑1‑磷酸盐；所述弱碱溶液为下列之一：环己胺甲醇溶液，氢氧化钠甲醇溶液，氢氧化钾水溶液或氢氧化钠水溶液；（4）2‑脱氧‑α‑D‑核糖‑1‑磷酸盐与尿嘧啶在尿苷磷酸化酶催化下，在pH值为6～8的磷酸盐缓冲液中、45～65℃下反应3～24小时，制得所述2′‑脱氧尿苷。