一种快速检测美国白蛾方法

摘要

本发明公开了一种快速检测美国白蛾方法，该方法包括：DNA的制备、PCR反应体系与反应条件和PCR结果判定步骤。该快速检测美国白蛾的方法，是一种高效、准确、便捷的美国白蛾分子检测技术，可在分子水平将美国白蛾与灯蛾科其他种类进行区分，能满足使用需求，具有很好的实用性，能产生较好的经济效益和社会效应。

主权项

一种快速检测美国白蛾方法，其特征在于，包括以下步骤：1）DNA的制备：采用GenMagBio 动物细胞组织/细胞基因组DNA 磁珠提取试剂盒提取待检测样品和美国白蛾标准对照样的DNA；2）PCR反应体系与反应条件50µL反应体系组成：5µL 10×Taq buffer、2 mmol/L MgCl2、200 µmol/L dNTP mix、2U Taq DNA 聚合酶、3µL DNA模板、特异性引物COI01 /02或SpmR01/02各1 µmol/L，ddH2O补齐；其中，特异性引物COI01 /02与SpmR01/02序列如下：COI01序列：5'‑CAGGAACTGGATGAACA‑3'，COI02序列：5'‑CCTACTGCTCATACGAA‑3'，SpmR01序列：5'‑ACGCTGTTGTCCGTATTT‑3'，SpmR02序列：5'‑CTGATTTCTTCGGTGTTG‑3'；反应程序为：94℃预变性2 min；94℃变性1 min、52℃复性30 s，72℃延伸30 s，进行30个循环；72℃延伸5 min；4℃保存；3）PCR结果判定混合8 µLPCR产物与2 µL 6×Glycerol DNA loading Buffer上样，以DNA Marker DL100为分子量标记，室温下恒压120 V，用3 %琼脂糖凝胶电泳45 min，0.5% µmol/L的EB染色，凝胶成像系统检测样品，拍照；照片显示美国白蛾标准对照样有清晰的扩增条带，待检测样品也具有相同条带即为美国白蛾，否则不是美国白蛾。