一种能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒的制备方法

摘要

本发明公开了一种能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒的制备方法，包括以下步骤：(1)制备重组载体pFastBacDual-polh-helicase；(2)将重组载体pFastBacDual-polh-helicase转化进E.coliDH10BmBacmid感受态细胞内，在培养板上培养，然后通过蓝白斑筛选获得阳性菌斑，从阳性菌斑中提取重组BmBacmid-polh-helicaseDNA；(3)将上述重组BmBacmid-polh-helicaseDNA转染到家蚕培养细胞，收集培养细胞上清，获得重组病毒BmEoNPV；(4)每将重组病毒注射，纯化得到重组病毒多角体。将上述重组核型多角体病毒喷洒在茶叶树叶面上，可防止茶尺蠖对茶叶树的危害，而且该方法成本低、生产易控。

主权项

一种能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 制备包含茶尺蠖核型多角体病毒的包膜蛋白odv‑e25、odv‑e28和解螺旋酶基因的片段，带启动子的家蚕核型多角体病毒基因polh的重组载体，得到重组载体pFastBacDual‑polh‑helicase；重组载体pFastBacDual‑polh‑helicase的制备方法包括以下步骤：(a) 以茶尺蠖核型多角体病毒EcobNPV的DNA为模板，采用PCR扩增法扩增出EcobNPV的包膜蛋白odv‑e25、odv‑e28和解螺旋酶基因的片段，克隆进pMD19‑T载体，获得质粒pMD19‑helicase；(b) 分离带启动子的家蚕核型多角体病毒基因polh，克隆进pFastBacDual载体，获得质粒pFastBac Dual‑polh；(c) 双酶切质粒pMD19‑helicase，回收EcobNPV的包膜蛋白odv‑e25、odv‑e28和解螺旋酶基因的片段，克隆进载体pFastBacDual‑polh，获得重组载体pFastBacDual‑polh‑helicase；(2) 将重组载体pFastBacDual‑polh‑helicase转化进E. coli DH10 BmBacmid 感受态细胞内，在培养板上培养，然后通过蓝白斑筛选获得阳性菌斑，从阳性菌斑中提取菌株中的重组Bacmid 基因组DNA；(3) 将上述重组BmBacmid‑polh‑helicase DNA转染到家蚕培养细胞，培养4～6天，收集培养细胞上清，获得P1代重组病毒BmEoNPV；采用P1代重组病毒BmEoNPV感染家蚕培养细胞，培养4～6天，收集培养细胞上清，获得P2代重组病毒BmEoNPV；(4) 每头5龄家蚕注射1～2微升P2代重组病毒BmEoNPV，发病后，纯化重组病毒多角体，即得所述能感染茶尺蠖的重组核型多角体病毒。