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一种细鳞鲑精液超低温冷冻保存方法，其特征在于一种细鳞鲑精液超低温冷冻保存方法按以下步骤进行：一、新鲜精液的采集：将细鳞鲑雄性亲本进行麻醉，麻醉后用干燥的无菌纱布将细鳞鲑雄性亲本体表和生殖孔擦拭干净；然后挤压腹部使精液流出，采集至器皿中，激活精子后将精子活动率超过80％的新鲜精液置于温度为0～4℃的条件下保温待用；二、精液抗冻混合液的制备：按二甲基亚砜和稀释液的体积比为（2～4）∶17，按稀释液中胎牛血清和葡萄糖质量比为100∶（1.4～1.6），分别称取二甲基亚砜、胎牛血清和葡萄糖，然后将二甲基亚砜分成三等份，先取第一份二甲基亚砜与胎牛血清混合，在温度为3～5℃的条件下保温8～12min，再按照二甲基亚砜和稀释液的总体积与步骤一的新鲜精液的体积之比为（2～4）∶1，将步骤一的新鲜精液加入，充分混合后在温度为3～5℃的条件下保温8～12min，然后再加入第二份二甲基亚砜，充分混合后在温度为3～5℃的条件下保温1～3min，再加入第三份二甲基亚砜，充分混合后在温度为3～5℃的条件下保温，最后加入葡萄糖，得到精液抗冻混合液；三、精液抗冻混合液的分装：将步骤二得到的精液抗冻混合液分装于冷存管中，然后在温度为3～5℃的条件下保温；四、精液抗冻混合液冷冻：首先将液氮导入带盖泡沫箱中，液氮液面距离箱口14～16cm，使步骤三的冷存管在液氮表面6～10cm处停留2～5min，然后在距液氮面1～3cm处停留1～3min，最后直接放入液氮中保存；五、精液抗冻混合液冷冻后的解冻：将步骤四后的冷存管放在温度为25～30℃的水浴中，摇动冷存管至冷存管中精液抗冻混合液溶解45%～55%，然后取出放置室温下至完全解冻。 |
