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Método in vitro de purificación de eritropoyetina, que comprende: a) proporcionar una solución que contiene: i) eritropoyetina, e ii) iones calcio a una primera concentración, que comprende TRIS-HCl 20 mM, CaCl2 5 mM, pH 6,9 ± 0,2, b) proporcionar una columna de cromatografía que contiene una fase estacionaria que contiene hidroxiapatito cerámico, c) aplicar una solución que contiene iones calcio a una segunda concentración en la columna de b) que comprende TRIS-HCl 20 mM, CaCl2 5 mM, NaCl 0,25 M, 2-propanol al 9% (v/v) con un pH de 6,9 ± 0,2, d) aplicar la solución de a) en la columna obtenida en c), e) aplicar una solución que contiene iones calcio a una tercera concentración en la columna obtenida en d) que comprende TRIS-HCl 20 mM, NaCl 0,25 M, 2-propanol al 9% (v/v) con un pH de 6,9 ± 0,2, y f) recuperar la eritropoyetina purificada mediante la aplicación de una solución que contiene iones calcio a una cuarta concentración en la columna obtenida en e) que comprende TRIS-HCl 10 mM, pH 6,9 ± 0,2, en el que dichas primera y segunda concentraciones de ión calcio son iguales y dichas tercera y cuarta concentraciones de ión calcio son iguales, inferiores a dichas primera y segunda concentraciones de ión calcio, en el que dichas tercera y cuarta concentraciones de ión calcio son de 0,1 mM o inferiores. |
