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<p>Un método para determinar el número de copias de un primer ácido nucleico diana y un segundo ácido nucleico diana, que comprende: a) poner en contacto un primer ácido nucleico diana con un primer conjunto de cebadores y un segundo ácido nucleico diana con un segundo conjunto de cebadores y añadir un único marcador de detección para formar una mezcla de reacción en un sistema homogéneo, en el que el número de copias de la primera secuencia de ácido nucleico diana es mayor que el número de copias de la segunda secuencia de ácido nucleico diana, b) amplificar por la reacción en cadena de la polimerasa el primer ácido nucleico diana con el primer conjunto de cebadores para formar un primer amplicón que tiene una primera temperatura de fusión (Tm) y amplificar por la reacción en cadena de la polimerasa el segundo ácido nucleico diana con el segundo conjunto de cebadores para formar un segundo amplicón que tiene una segunda Tm, en el que dicha segunda Tm es mayor que dicha primera Tm; c) durante la reacción en cadena de la polimerasa, determinar la cantidad del marcador de detección a una primera temperatura de adquisición, en el que dicha primera temperatura de adquisición de la señal está por debajo de dicha primera Tm; d) incrementar la temperatura de la mezcla de reacción hasta una segunda temperatura de adquisición de la señal y determinar la cantidad del marcador de detección, en el que dicha segunda temperatura de adquisición de la señal está por encima de dicha primera Tm y por debajo de dicha segunda Tm; e) repetir las etapas (b) a (d) al menos una vez; y f) determinar el número de copias relativo de dicho primer y dicho segundo ácidos nucleicos diana.</p> |
