一种高效液相色谱峰保留时间预测方法

摘要

本发明涉及一种高效液相色谱峰保留时间预测方法。该方法包括：测定各种样品的各种成分的标准保留时间，在每个样品的目标成分中选择两个成分作为该样品的双标对照成分，获得双标对照成分在待测样品的供试品溶液中的实测保留时间，获得其他目标成分的实测保留时间，进行两点验证和多点验证等步骤。采用本发明提供的高效液相色谱峰保留时间预测方法能够准确预测待测样品的各种成分的色谱峰的保留时间，进而对待测样品的色谱峰进行定性，进行待测样品的鉴别。本发明所提供的方法具有较高的预测精度，适用的色谱柱数量多，明显优于现有的相对保留时间法。

主权项

一种高效液相色谱峰保留时间预测方法，其包括以下步骤：（1）利用高效液相色谱仪测定各种样品的各种成分在多根不同的色谱柱上的实测保留时间，对在不同色谱柱上测定的同一样品的各种成分的实测保留时间两组两组地进行线性拟合，分别绘制标准曲线并计算相关系数r，剔除r＜0.995的色谱柱测定的实测保留时间、偏离较大的色谱柱测定的实测保留时间以及导致色谱峰顺序改变的色谱柱测定的实测保留时间，以剩下的色谱柱测定的实测保留时间的平均值作为各种成分的标准保留时间；或者，以在所有色谱柱上测定的同一样品的同一成分的实测保留时间的平均值为初拟标准保留时间，以所有成分的初拟标准保留时间与所有色谱柱上测定的同一样品的所有成分的实测保留时间分别进行线性拟合，分别绘制标准曲线并计算相关系数r，剔除r＜0.995的色谱柱测定的实测保留时间、偏离较大的色谱柱测定的实测保留时间以及导致色谱峰顺序改变的色谱柱测定的实测保留时间，以剩下的色谱柱测定的实测保留时间的平均值作为各种成分的标准保留时间；（2）在每一个样品的目标成分中选择两个成分作为该样品的双标对照成分；（3）在一根色谱柱上运行待测样品的供试品溶液和双标对照成分的对照品溶液并利用高效液相色谱仪进行检测，获得供试品溶液的色谱图，通过双标对照成分的对照品对所获得的色谱图中的色谱峰进行定性，获得双标对照成分在供试品溶液中的实测保留时间；（4）以双标对照成分的标准保留时间为纵坐标、实测保留时间为横坐标建立线性曲线，并得到两点线性方程；（5）将除双标对照成分之外的待测样品的目标成分的标准保留时间带入所述两点线性方程，获得相应目标成分的预测保留时间，根据该预测保留时间对供试品的色谱图中的其他色谱峰进行定性，得到相应目标成分的实测保留时间；如果所有的除双标对照成分之外的待测样品的目标成分的标准保留时间和实测保留时间的偏差的绝对值均＞t2，则预测失败，更换步骤（3）中的色谱柱，并重复步骤（3）‑（5）；如果除双标对照成分之外的待测样品的目标成分之中至少有一个目标成分的标准保留时间和实测保留时间的偏差的绝对值≤t2，则进入步骤（6）；（6）以所有实测保留时间与预测保留时间的偏差的绝对值≤t2的目标成分与双标对照成分的标准保留时间为纵坐标、实测保留时间为横坐标建立多点关系曲线并得到多点线性方程；（7）将除双标对照成分之外的待测样品的目标成分的标准保留时间带入多点线性方程，计算得到相应目标成分的新的预测保留时间；（8）在供试品的色谱图中找到与新的预测保留时间最接近的色谱峰，得到相应目标成分的新的实测保留时间，并计算各个目标成分的新的实测保留时间与新的预测保留时间的偏差的绝对值，以判断多点线性方程是否包括了所有目标成分：如果所有的偏差的绝对值≤t2，则进入下一步骤，如果有偏差的绝对值＞t2，则返回步骤（6），以步骤（8）中计算的所有偏差的绝对值≤t2的目标成分与双标对照成分的标准保留时间为纵坐标、实测保留时间为横坐标重新建立多点关系曲线并得到新的多点线性方程，重复步骤（6）‑（8）；（9）检测所有目标成分的标准保留时间与新的预测保留时间的偏差的绝对值是否≤tm，且tm＜t2：如果是，则预测成功；如果不是，则预测失败；预测失败时，更换步骤（3）中的色谱柱，重复步骤（3）‑（9）。