检测膀胱癌尿液miRNA-155的专用引物、试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种检测膀胱癌尿液miRNA-155的专用引物、试剂盒及检测方法，能够快速、简便、准确的检测膀胱癌尿液中miRNA-155的表达量。该专用试剂盒包括检测膀胱癌尿液miRNA-155的专用逆转录引物和检测引物以及RNA分离液；RNA分离液由2.5%吐温20、50mmol/L三羟甲基氨基甲烷、1mmol/L乙二胺四乙酸和1%牛血清白蛋白组成。本发明为膀胱癌的早期发现、早期治疗提供了重要的参考依据。

主权项

一种检测膀胱癌尿液miRNA‑155的专用试剂盒，其特征在于，包括检测膀胱癌尿液miRNA‑155的专用引物，以及RNA分离液；所述RNA分离液由吐温20、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、牛血清白蛋白和水组成，其中，浓度如下：吐温20：2.5%，三羟甲基氨基甲烷：50mmol/L，乙二胺四乙酸：1mmol/L，牛血清白蛋白：1%；还包括PCR反应液，所述PCR反应液由Syber GreenⅠ荧光染料、DNA聚合酶、dNTPs、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、氯化钾、氯化镁和水组成，其中，各物质的浓度如下：DNA聚合酶：100U/mL；dNTPs：0.2mM；氯化镁：6mM；三羟甲基氨基甲烷盐酸盐：16.5mM；氯化钾：89.3mM； 其中，所述检测膀胱癌尿液miRNA‑155的专用引物，包括： （1）miRNA‑155的逆转录引物和检测引物，逆转录引物的序列如SEQ ID NO：1所示，检测引物的序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示： miRNA‑155‑RT：5’‑GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACCCCT‑3’； miRNA‑155‑F：5’‑CGCCTTAATGCTAATCGTGAT‑3’； miRNA‑155‑R：5’‑GTGCAGGGTCCGAGGT‑3’； （2）miRNA‑191的逆转录引物和检测引物，逆转录引物的序列如SEQ ID NO：4所示，检测引物的序列如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示 miRNA‑191‑RT：5’‑GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCAGCTG‑3’； miRNA‑191‑F：5’‑GCCAACGGAATCCCAAAAG‑3’； miRNA‑191‑R：5’‑GTGCAGGGTCCGAGGT‑3’； 3）miRNA‑16的逆转录引物和检测引物，逆转录引物的序列如SEQ ID NO：7所示，检测引物的序列如SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9所示： miRNA‑16‑RT：5’‑GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCGCCAA‑3’； miRNA‑16‑F：5’‑CGCCTAGCAGCACGTAAATA‑3’； miRNA‑16‑R：5’‑GTGCAGGGTCCGAGGT‑3’。