检测小麦抗病基因的多重PCR试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种用于鉴定或辅助鉴定小麦抗病基因的PCR试剂盒及其应用。本发明所提供的PCR试剂盒中包含用于鉴定或辅助鉴定小麦抗病基因的多重PCR引物对组，该引物对组由特异于所述Yr17-Lr37-Sr38基因簇的一个引物对，和特异于所述Pch1基因的一个引物对组成；所述特异于Yr17-Lr37-Sr38基因簇的一个引物对为序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1；所述特异于Pch1基因的一个引物对为序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2。本发明所提供的引物对组各引物对间不存在抑制和错配，实现了相同温度一次PCR完成一组基因的鉴别，且结果可靠、重复性好，特异性强，成本低，耗时短，为小麦抗病品种选育提供参考依据。

主权项

鉴定或辅助鉴定待测小麦是否含有Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇，是否含有Pch1基因，以及所述Pch1基因是纯合还是杂合的方法，其特征在于：所述方法包括下述（1）和（2）的步骤：（1）以待测小麦的基因组DNA为模板，用多重PCR引物对组进行PCR反应，获得PCR产物；所述PCR反应的退火温度为：前8个循环为55℃；第9‑16个循环为65℃；第17‑36个循环为55℃；第37‑56个循环为65℃；所述多重PCR引物对组由特异于所述Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇的一个引物对，和特异于所述Pch1基因的一个引物对组成；所述特异于Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇的一个引物对为序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1；所述特异于Pch1基因的一个引物对为序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2；所述引物对组中每个引物对的两条引物在PCR反应体系中等量使用，且所述引物对1和所述引物对2在PCR反应体系中的摩尔比为1:1；（2）检测步骤（1）得到的PCR产物的大小，根据PCR产物确定所述待测小麦是否含有或候选含有Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇，是否含有或候选含有Pch1基因，以及所述Pch1基因是纯合还是杂合；其中，根据PCR产物确定所述待测小麦是否含有或候选含有Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇的方法如下：若所述PCR产物满足如下a1）的条件，则所述待测小麦含有Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇或候选含有Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇；若所述PCR产物不满足如下a1）的条件，则所述待测小麦不含有Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇或候选不含有Yr17‑Lr37‑Sr38基因簇；根据PCR产物确定所述待测小麦是否含有或候选含有Pch1基因的方法如下：若所述PCR产物满足如下a2）的条件，则所述待测小麦含有Pch1基因或候选含有所述Pch1基因；若所述PCR产物不满足如下a2）的条件，同时满足如下a3）的条件，则所述待测小麦不含有Pch1基因或候选不含有所述Pch1基因；根据PCR产物确定所述待测小麦所含所述Pch1基因是纯合还是杂合的方法如下：若所述PCR产物同时满足如下a2）和a3）的条件，则所述待测小麦含有Pch1基因或候选含有所述Pch1基因，且所述Pch1基因为杂合或候选为杂合；若所述PCR产物满足如下a2）的条件，同时不满足如下a3）的条件，则所述待测小麦含有Pch1基因或候选含有所述Pch1基因，且所述Pch1基因为纯合或候选为纯合；a1）所述PCR产物含有259bp的DNA片段；a2）所述PCR产物含有240bp的DNA片段；a3）所述PCR产物含有222bp的DNA片段。