一种分析骆驼蓬草中有效成分的方法

摘要

本发明公开了一种分析骆驼蓬草中有效成分的方法，包括：构建指纹图谱，通过指纹图谱定性分析其中的有效成分，通过HPLC法检测有效成分的含量；所述指纹图谱指TLC指纹图谱和/或HPLC指纹图谱。本发明构建的指纹图谱具有优异的重现性和专属性，对有效成分的含量检测方法具有良好的稳定性、精密度和加样回收率，可实现定性和定量分析骆驼蓬草中的多种有效成分：鸭嘴花碱、骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、脱乙酰骆驼蓬苷和骆驼蓬苷，能较全面地评价骆驼蓬草的质量，可为研究和开发骆驼蓬草的药用价值提供科学的依据；而且本发明的分析方法还具有操作简单、快速、经济、可操作性强等优点，可推广应用。

主权项

一种分析骆驼蓬草中有效成分的方法，包括：构建指纹图谱，通过指纹图谱定性分析其中的有效成分，通过HPLC法检测有效成分的含量；所述指纹图谱指TLC指纹图谱和/或HPLC指纹图谱；其特征在于，①TLC指纹图谱的构建包括如下步骤：a)供试品溶液的制备取骆驼蓬草粉末，加甲醇超声处理，其中：1g骆驼蓬草粉末加10mL甲醇；过滤，蒸干滤液；残渣用甲醇溶解，即得供试品溶液，其中：1g骆驼蓬草得到的残渣用2～20mL甲醇溶解；b)对照品溶液的制备取去氢骆驼蓬碱对照品、骆驼蓬碱对照品和鸭嘴花碱对照品，加甲醇制成每1ml各含0.1mg～1mg的混合溶液，即为对照品溶液；c)取上述供试品溶液和对照品溶液各5μL，分别点样于含荧光的硅胶高效薄层板上，以乙酸乙酯‑甲醇‑氨水按体积比10∶1.5∶0.5形成的混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干后，采用紫外显色或/和碘化铋钾显色或/和生物自显影，测算各特征峰的Rf值；所述的紫外显色是指在254nm的紫外灯下检视；所述的碘化铋钾显色是指喷碘化铋钾试液后置105℃加热至斑点显色；所述的生物自显影是指将薄层板浸入含有0.05mol/L乙酰胆碱酯酶、pH=7.8的盐酸三羟甲基氨基甲烷（Tris‑HCl）缓冲液中，先于37℃的恒温水浴中保温、保湿处理20分钟，再在由乙酸‑α‑萘酯与坚牢蓝B盐(Fast Blue B Salt)现配的混合溶液中浸板1～2分钟，然后取出在自然光下观察薄层色谱图；d)测定10～30批骆驼蓬草的TLC指纹图谱并进行比较，得到由其共有特征峰构成的骆驼蓬草的TLC指纹图谱：鸭嘴花碱峰的Rf值为0.60±0.025，骆驼蓬碱峰的Rf值为0.67±0.030，去氢骆驼蓬碱峰的Rf值为0.84±0.026；②HPLC指纹图谱的构建包括如下步骤：e)供试品溶液的制备取骆驼蓬草粉末，加醇水溶液超声处理，其中：0.5g骆驼蓬草粉末加10mL醇水溶液；取出，放置至室温，用醇水溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，即为供试品溶液；所述的醇水溶液是体积百分比浓度为70%的甲醇水溶液；f)对照品溶液的制备精密称取鸭嘴花碱、骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、脱乙酰基骆驼蓬苷和骆驼蓬苷适量，精密称定，加甲醇或乙醇配制成每1mL含鸭嘴花碱80μg、骆驼蓬碱20μg、去氢骆驼蓬碱20μg、脱乙酰基骆驼蓬苷50μg和骆驼蓬苷50μg的混合溶液，即为对照品溶液；g)精密吸取步骤e)制备的供试品溶液和步骤f)制备的对照品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪进行测定，高效液相色谱条件如下：色谱柱是十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相A是乙腈，流动相B是体积百分比为0.1%的三氟乙酸水溶液，进行梯度洗脱，检测波长为265nm，进样量为2～50μL，柱温为15～50℃，流速为0.5～1.5mL/min，测定时间为70～80min；所述的洗脱梯度如下：0至5分钟，流动相A的体积为5%，流动相B的体积为95%；5至70分钟，流动相A的体积由5%变为29%，流动相B的体积由95%变为71%；70至80分钟，流动相A的体积为29%，流动相B的体积为71%；h)根据10～30批骆驼蓬草的测定结果，采用均值法，分别从16个特征指纹峰中确定了5个共有特征峰：2号峰鸭嘴花碱、9号峰骆驼蓬碱、10号峰去氢骆驼蓬碱、12号峰脱乙酰基骆驼蓬苷、15号峰骆驼蓬苷；以鸭嘴花碱峰为参照的其它4个共有特征峰的平均相对保留时间及相对标准偏差(RSD)分别如下：9号峰骆驼蓬碱的平均相对保留时间为2.76，RSD为0.71%；10号峰去氢骆驼蓬碱的平均相对保留时间为2.87，RSD为0.79%；12号峰脱乙酰基骆驼蓬苷的平均相对保留时间为3.16，RSD为0.79%；15号峰骆驼蓬苷的平均相对保留时间为3.59，RSD为0.76%；③通过HPLC法对有效成分的含量检测，包括如下步骤：i)供试品溶液的制备取骆驼蓬草粉末，加醇水溶液超声处理，其中：0.5g骆驼蓬草粉末加10mL醇水溶液；取出，放置至室温，用醇水溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，即为供试品溶液；所述的醇水溶液是体积百分比浓度为70%的甲醇水溶液；j)精密吸取供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪进行测定，高效液相色谱条件如下：色谱柱是十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相A是乙腈，流动相B是体积百分比为0.1%的三氟乙酸水溶液，进行梯度洗脱，检测波长为265nm，进样量为2～50μL，柱温为15～50℃，流速为0.5～1.5mL/min，测定时间为70～80min；所述的洗脱梯度如下：0至5分钟，流动相A的体积为5%，流动相B的体积为95%；5至70分钟，流动相A的体积由5%变为29%，流动相B的体积由95%变为71%；70至80分钟，流动相A的体积为29%，流动相B的体积为71%；k)得到的高效液相色谱图中：2号峰为鸭嘴花碱，保留时间为18.6±0.18分钟；9号峰为骆驼蓬碱，保留时间为51.1±0.10分钟；10号峰为去氢骆驼蓬碱，保留时间为53.1±0.10分钟；12号峰为脱乙酰基骆驼蓬苷，保留时间为58.4±0.08分钟；15号峰为骆驼蓬苷，保留时间为66.4±0.08分钟。