发明名称 |
一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法 |
摘要 |
一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法,包括下列步骤:A.血液分离;B.溶血破碎细胞;C.热变性;D.压滤;E.超滤浓缩;F.沉淀除杂蛋白。本发明彻底摒弃了氯仿、乙醇和丙酮等有机溶剂,根据SOD分子的结构特点及理化性质,采用热变性和金属盐沉淀的方法,简便的分离出具有较高活力的粗品SOD,这是对SOD生产的是革命性的改进。由于不使用任何有机溶剂,所以该方法成本低廉,更适合于工业化生产。本发明由于采用热变性除血红蛋白,因此可以在常温下溶血,使操作更简便,降低能耗。 |
申请公布号 |
CN103436500A |
申请公布日期 |
2013.12.11 |
申请号 |
CN201310369613.8 |
申请日期 |
2013.08.22 |
申请人 |
慈溪市迈康生物科技有限公司 |
发明人 |
龚兴国;秦勇;聂颢;韩斌;应育权 |
分类号 |
C12N9/02(2006.01)I |
主分类号 |
C12N9/02(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法,其特征在于包括下列步骤:A.血液分离:取动物新鲜血液,加入质量浓度为5~13%的柠檬酸钠溶液,柠檬酸钠溶液的体积为血液体积的5~10%,经抗凝处理后经连续流离心机离心收集红细胞,泵入水解反应罐;B.溶血破碎细胞:向步骤A收集的红细胞中加入1~3倍体积的纯净水,使红细胞完全破碎,得红细胞溶血液;C.热变性:将红细胞溶血液加热至60℃保温10~30分钟后,再向红细胞溶血液中加入用以提高溶液的离子强度的碱金属盐,至碱金属盐浓度为0.1~0.6mol/L,继续加热至65℃,保温20~60分钟后,再升温至70~75℃,保温15至20分钟,立即放料冷却;D.压滤:用800目滤布对经步骤C处理的红细胞溶血液进行机械压滤,滤液为SOD粗提液;E.超滤浓缩:SOD粗提液先经超滤膜预处理拦截分子量大于100万的大分子蛋白和细胞膜碎片,然后经截留分子量8000孔径的超滤膜反复超滤,去除水分、无机盐和小分子杂蛋白,直至浓缩到SOD粗提液体积的2%~12%,即为SOD浓缩液;F.沉淀除杂蛋白:向步骤E所得的SOD浓缩液中加入金属盐,至该金属盐浓度为1~5mmol/L,搅拌均匀后静置沉淀,离心去沉淀,上清液经超滤脱盐后获得SOD粗品。 |
地址 |
315311 浙江省慈溪市龙山工业区龙镇大道168号 |