扩增核酸的方法

摘要

本发明提供一种使用寡核苷酸引物和DNA聚合酶能够进行核酸扩增的方法。本发明提供一种核酸的扩增方法，其包括：将含有至少一种脱氧核苷三磷酸、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少两种寡核苷酸引物、以及作为模板的核酸片段的反应溶液进行孵育，以上述引物的3’末端作为起点进行聚合酶反应，从而将该核酸片段扩增，其特征在于，对于在200个碱基以内存在有两处以上的由4个以上连续碱基构成的序列X的区域，设计第一寡核苷酸引物及第二寡核苷酸引物。

主权项

一种扩增核酸的方法，其包括：通过将含有至少一种脱氧核苷三磷酸、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少两种寡核苷酸引物、以及作为模板的核酸片段的反应溶液进行孵育，以上述引物的3’末端作为起点进行聚合酶反应，从而将所述核酸片段扩增，其特征在于，设计第一寡核苷酸引物及第二寡核苷酸引物，使得在200个碱基以内存在有两处以上的由4个以上连续碱基构成的序列X的区域或者该区域的一部分能够扩增，其中：(i)对于在200个碱基以内存在有两处以上的由4个以上连续碱基构成的序列X的区域，设计第一寡核苷酸引物及第二寡核苷酸引物，其中，针对夹在5’侧的序列X的5’末端碱基和3’侧的序列X的3’末端碱基之间的区域来设计所述第一寡核苷酸引物；并且，针对夹在5’侧的序列X的5’末端碱基和3’侧的序列X的3’末端碱基之间的区域的互补链来设计所述第二寡核苷酸引物，而且，所述第二寡核苷酸引物设计在与所述第一寡核苷酸引物互补的序列的5’侧；(ii)对于在200个碱基以内存在有两处以上的由4个以上连续碱基构成的序列X的区域，设计第一寡核苷酸引物及第二寡核苷酸引物，其中，针对5’侧的序列X的5’侧的100个碱基以内的区域来设计所述第一寡核苷酸引物；并且，针对夹在5’侧的序列X的5’末端碱基和3’侧的序列X的3’末端碱基之间的区域的互补链来设计所述第二寡核苷酸引物；或者(iii)对于在200个碱基以内存在有两处以上的由4个以上连续碱基构成的序列X的区域，设计第一寡核苷酸引物及第二寡核苷酸引物，其中，针对5’侧的序列X的5’侧的100个碱基以内的区域来设计所述第一寡核苷酸引物；并且，针对3’侧的序列X的3’侧的100个碱基以内的区域的互补链来设计所述第二寡核苷酸引物。