基于Au NPs和DNA循环双放大技术的适配体传感器构建及应用

摘要

本发明公开了一种基于Au NPs和DNA循环双放大技术的适配体传感器构建及其在腺苷检测中的应用，属于适配体传感技术领域。该检测系统包含腺苷适配体、与适配体部分杂交的探针DNA、Au NPs标记的发夹结构DNA和组装在金片表面的发夹结构DNA。当没有腺苷时，Au NPs标记DNA保持发夹结构而不能与金片表面的发夹DNA杂交，无法将Au NPs捕获到金片表面。当存在腺苷时，腺苷与其适配体结合，探针DNA则从适配体/探针DNA双链中释放出来而与Au NPs标记的发夹DNA杂交使其开环，开环后的AuNPs标记DNA与金片表面的DNA杂交将Au NPs捕获到金片上，替换出来的探针DNA引发下一轮DNA链替换反应，如此循环，单个腺苷分子可引发大量Au NPs组装到金片上，获得增强的SPR信号，用于对腺苷的高灵敏检测。

主权项

基于Au NPs和DNA循环双放大技术的适配体传感器构建，其特征在于所述构建包括以下步骤：（1）Au NPs的制备：将50 mL的质量百分比为0.01%的HAuCl4溶液加入到100 mL圆底烧瓶中，加热至沸腾后，在机械搅拌下迅速加入1 mL的质量百分浓度为5%的柠檬酸三钠溶液，继续搅拌并保持沸腾，溶液颜色由黄色变成深酒红色时停止加热，搅拌下自然冷却至室温，即获得平均粒径为13 nm的稳定且单分散的Au NPs，于4 °C保存备用；（2）Au NPs标记发夹结构DNA的制备：巯基化DNA用100 μL新配制的1 mM二硫苏糖醇溶液活化过柱后，与1 mL步骤（1）制备的Au NPs溶液混合，在摇床上振荡孵育12 h，将产物分散于磷酸盐缓冲溶液中，25 °C放置40 h；在14000 rpm下离心10 min，弃去上清液，离心后的红色油状沉淀用磷酸盐缓冲溶液清洗并离心3次，除去没有与Au NPs反应的DNA；将获得的Au NPs标记的发夹结构DNA重悬于磷酸盐缓冲溶液中，4 °C下保存备用；（3）SPR适配体传感界面的构建：将金片在体积比7:3的H2SO4:H2O2混合溶液中浸泡2 min，用二次水冲洗干净，浸入10 mM的巯基己醇溶液中2 h，用二次水冲洗并用氮气吹干后，装入SPR检测池；注入50 μL、1.2 μM的巯基化发夹结构DNA溶液反应2 h，制得预组装了巯基化发夹结构DNA的传感界面。