发明名称 |
一种化学发光测定三聚氰胺的方法 |
摘要 |
本发明属于化学发光传感器领域,涉及利用目标诱导链释放技术,结合杂交链式反应和化学发光技术测定三聚氰胺(Me)的方法。当有目标物Me存在时,Me与功能化磁珠FMB1表面的双链DNA中的适体DNA1作用,释放出适体的互补序列DNA2。释放出来的互补序列DNA2与另一功能化的磁珠(FMB2)作用,在修饰HRP的发夹DNA(HRP-H1和HRP-H2)存在下进行链式杂交反应,使两种修饰的DNA生长成为一条长的双链DNA。通过磁性分离,再利用HRP对luminol-H2O2化学发光体系的催化作用产生化学发光,通过测定化学发光强度实现Me的测定。本方法具有高的选择性和检测灵敏度。 |
申请公布号 |
CN103439320A |
申请公布日期 |
2013.12.11 |
申请号 |
CN201310398470.3 |
申请日期 |
2013.09.04 |
申请人 |
青岛科技大学 |
发明人 |
混旭 |
分类号 |
G01N21/76(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I |
主分类号 |
G01N21/76(2006.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种化学发光测定三聚氰胺的方法,其特征是包括以下步骤:FMB1的制备:将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后,加入200 μl 1.0×10‑5 M的DNA1和1.0×10‑5 M的DNA2混合物,在37°C下反应12小时;将所得的功能化磁性金纳米粒子(FMB1)用磷酸盐缓冲液洗涤,然后分散在磷酸盐缓冲液中,保存在4°C下备用;FMB2的制备:将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后,100 μl 1.0×10‑5 M的H1,在37°C下反应12小时;将所得的功能化磁性金纳米粒子(FMB2)用磷酸盐缓冲液洗涤,然后分散在磷酸盐缓冲液中,保存在4°C下备用;制备HRP(辣根过氧化物酶)修饰的H1:在100 μl 1.0×10‑5 M的H1加入10 mg NHS(N‑羟基琥珀酰亚胺), 20 mg EDC(1‑(3‑二甲氨基醛)‑3‑乙基二亚胺盐酸盐),在37 °C下搅拌1小时,然后加入100 μl HRP,在37 °C下搅拌过夜,即得;制备HRP修饰的H2:在100 μl 1.0×10‑5 M的H2加入10 mg NHS, 20 mg EDC,在37 °C下搅拌1小时,然后加入100 μl HRP,在37 °C下搅拌过夜,即得;1.5 Me(三聚氰胺)的检测:取含Me的标准溶液50 μL加入到200 μL的FMB1溶液,37°C反应40分钟,然后混合物在磁力架上分离,将上清液转移到FMB2溶液中;然后加入含有 5.0×10‑7 M HRP‑H1和 5.0×10‑7 M HRP‑H2溶液200 μL,在 37 ℃反应 1 h后进行磁分离,除去上清液,将磁珠用 100 μL磷酸缓冲溶液清洗两遍后,分散于1.0 ml磷酸缓冲溶液中,然后进行化学发光检测。 |
地址 |
266000 山东省青岛市市北区郑州路53号化学与分子工程学院 |