一种免提取直接扩增极微量样品DNA条形码的方法及试剂盒

摘要

发明公开了一种免提取直接扩增极微量样品DNA条形码的方法及试剂盒。本发明通过加入裂解液和缓冲液且所加入的缓冲液与裂解液的体积比为0～9：1，得到极微量样品的DNA溶液，采用正向引物LCO1490和反向引物HCO2198进行PCR扩增，即得到极微量样品的DNA条形码序列。本发明通过优化裂解液和缓冲液的配方及两者的使用比例，同时优化了反应体系和反应条件，能够避免将多头极微小动物单个个体混合提取模板DNA，从而保证了DNA模板来源的单一性，本发明的方法稳定性好、扩增效率高，具有极大的可靠性和适应性。

主权项

一种免提取直接扩增极微量样品DNA条形码的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）、DNA模板的制备：取一只极微小动物个体或动物个体的部分组织，加入裂解液，研磨，95℃放置10min，4000rpm短暂离心5s，然后加入缓冲液，所加入的缓冲液与裂解液的体积比为0～9：1，95℃放置10min，12000rpm离心1min，弃沉淀，所得的上清液即为极微量样品的DNA溶液；所述裂解液为10～100mM的NaOH溶液，所述缓冲液，其成分及制备方法为：100mM Tris，1M KCl，10mM EDTA，调pH为9.5，高压灭菌；（2）、DNA条形码序列的扩增：以步骤（1）的极微量样品的DNA溶液为模板，采用正向引物LCO1490:5’‑GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG‑3’和反向引物HCO2198:5’‑TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA‑3’进行PCR扩增，即得到极微量样品的DNA条形码序列。