一种快速获取鹅OAZ1基因全长CDS序列及快速检测其表达规律的方法

摘要

一种快速获取鹅OAZ1基因全长CDS序列及快速检测其表达规律的方法，包括以下步骤：提取鹅卵巢组织中的总RNA，然后将总RNA反转录为cDNA；分别以鸟类OAZ1和β-actin基因的保守区作为模板，设计OAZ1基因的全长CDS序列引物(OAZ1-L)，快速检测OAZ1基因表达规律的OAZ1和β-actin荧光定量特异性引物；通过RT-PCR扩增反应，PCR产物的回收纯化，DH5α感受态细胞的制备，目的基因的连接、连接产物的转化，阳性菌落的筛选，菌液测序获取全长OAZ1基因全长CDS序列，并测序鉴定所设计的荧光定量引物能特异性的扩增OAZ1和β-actin基因；然后再利用荧光定量PCR进一步鉴定，鉴定结果表明所建立的方法能快速、准确地检测鹅机体中OAZ1基因的表达规律。

主权项

一种快速获取鹅OAZ1基因全长CDS序列及快速检测其表达规律的方法包括以下步骤：1)取鹅卵巢组织中的总RNA，并将其反转录为cDNA；2)设计OAZ1‑L基因的引物，长度为874bp；Forward：TGCGGGGTGTTCAAGATGTReverse：GAGGGAGAGGACCTGCAAAC设计OAZ1‑S基因的引物，长度为141bp；Forward：ACTTCAGGAACCCTCGCATCAACTReverse：GCTGCCCTCATCTTTCTAATACGG设计β‑actin基因的引物，长度为222bp；Forward：GCGGCATGCCACACCGTGCCCATCTATGAGReverse：GCGAAGCTTGGCCATCTCCTGCTCGAAGT3)通过RT‑PCR扩增反应、PCR产物的回收纯化、DH5α感受态细胞的制备、目的基因的连接、连接产物的转化、阳性菌落的筛选、菌液测序获取全长OAZ1序列。4)应用实时荧光定量PCR技术构建OAZ1和β‑actin荧光定量PCR引物的标准曲线和溶解曲线，进一步鉴定所设计的OAZ1和β‑actin荧光定量引物的特异性和准确性。