一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法

摘要

一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法，其特征在于：快速采集新鲜烟叶并用液氮现场进行速冻，采用冷冻干燥方法除去水分后对烟叶进行粉碎，用甲醇-氯仿混合溶剂超声提取烟粉中次生代谢物，离心后，吸取上清液低温下悬蒸或离心浓缩，浓缩后的样品溶液直接采用GC-MS进行分析。本发明的突出优点是发展了适用于新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的提取方法。并且方法简单、有效且重现性好，可以弥补经典的衍生化GC-MS的无法检测挥发、半挥发次生代谢物的不足。

主权项

1.一种用于测定新鲜烟叶中挥发、半挥发次生代谢物的方法，其特征在于：快速采集新鲜烟叶并用液氮现场进行速冻，采用冷冻干燥方法除去水分后对烟叶进行粉碎，用甲醇-氯仿混合溶剂超声提取烟粉中次生代谢物，离心后，吸取上清液低温下旋蒸或离心浓缩，浓缩后的样品溶液直接采用GC-MS进行分析,具体步骤如下：(1) 烟叶的采集、处理、干燥、粉碎：快速采摘烟株指定部位烟叶，用液氮迅速冷冻以终止生命过程，冷冻干燥24h以除去烟叶水分，干燥过的烟叶粉碎至40-60目，放于-20℃冰箱保存；(2) 提取次生代谢物：称量50-250mg的烟粉，加入内标溶液、6-8ml甲醇-氯仿萃取溶剂进行超声提取，提取液经高速离心后，取4-6ml上清液进行浓缩，浓缩液经0.45μm微孔滤膜过滤后直接用GC-MS分析；内标溶液为配在萃取溶剂中的氘代尼古丁溶液，浓度为200μg/ml，加入量为100μl；(3) 检测：采用GC-MS进行检测分析，色谱条件如下：色谱柱： DB-35ms，30m×0.25mm×0.25μm； 载气，He；流速：1.0ml/min；进样口温度：290℃；进样量：1μL；分流比为5:1；升温程序：60℃保持4min，然后以5℃/min的升温速度升到280℃，保持10 min，采用GC-MS进行检测分析时，所用色谱柱前接1.0m长的0.25mm内径的空管毛细管作为预柱；MS参数：采用全扫描模式；采集质量数范围：40-350。