Y染色体微缺失多重实时荧光PCR检测试剂盒

摘要

本发明涉及染色体缺失检测领域，尤其涉及Y染色体微缺失多重实时荧光PCR检测试剂盒。该试剂盒利用实时荧光PCR可以检测Y染色体AZFa亚区sY84和sY86位点，Y染色体AZFb亚区sY127和sY134位点，Y染色体AZFc亚区sY254和sY255位点的基因缺失。该试剂盒采用同源加尾引物与通用引物实现稳定高效的多重PCR反应体系，并利用不同荧光基团标记的核酸探针指示目标片段的存在情况，从而实现最快两管同时检测6个AZF缺失热点以及2个内控基因(SRY与ZFX/Y)上的序列。采用本发明所述试剂盒对男性Y染色体微缺失基因进行检测，具有快速、准确、高通量、低成本、无污染等优点。

主权项

一种Y染色体微缺失多重实时荧光PCR检测试剂盒，包括引物和荧光探针，其特征在于：所述引物包括用于扩增Y染色体AZFa亚区sY84和sY86位点，Y染色体AZFb亚区sY127和sY134位点，以及Y染色体AZFc亚区sY254和sY255位点的引物，所述的引物通过同源加尾的方式抑制引物二聚体的产生，提高检测灵敏度；所述引物中还包括一通用引物，其中，引物包括：特异性扩增Y染色体AZFa亚区sY84序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；特异性扩增Y染色体AZFa亚区sY86序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY127序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY134序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；特异性扩增Y染色体AZFc亚区sY254序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示；特异性扩增Y染色体AZFc亚区sY255序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示；特异性扩增男性特有SRY基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示；特异性扩增ZFX/Y基因的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示；以及通用引物序列，如SEQ ID NO：17所示；上述所有序列可由其碱基互补序列替换；荧光探针碱基序列如SEQ ID NO：18至SEQ ID NO：25所示。