一种高效分离脐带间充质干细胞的方法

摘要

本发明提供了一种简单、高效分离脐带间充质干细胞的方法，包括：使用插管分离脐带间充质干细胞以及使用trypLETM消化和无血清培养基培养脐带间充质干细胞的步骤。本发明能够更快的得到完全来自母体的脐带间充质干细胞，而且对细胞的损伤更小；经试验证明本发明的方法能最大可能的保护间充质干细胞，具有更高活率，以及有更高的活性，可以更加有效进行成脂、成骨诱导分化。

主权项

一种分离脐带间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）脐带间充质干细胞的分离：将两头结扎的脐带组织用无菌等渗溶液清洗，从一端结扎处内侧1‑2厘米处剪断，从断端的脐静脉插入无菌管子，并使得无菌管子在脐带外留出2厘米以上，在脐带断端内侧1‑2厘米左右处固定脐带与管子，从外侧预留管子处注入无菌等渗溶液5‑20毫升清洗脐静脉，清洗2次以上；再从管子注入10‑25毫升trypLETM酶溶液，37℃消化0.3‑0.5小时，排出消化液；然后，用无菌等渗溶液清洗一次；再次从管子注入5‑20毫升trypLETM酶溶液，37℃消化0.5‑1小时，收集第二次消化后的消化液，将消化液用滤网过滤得到单细胞为主的悬液；将细胞悬液离心，即得到脐带间充质干细胞；（2）脐带间充质干细胞的培养：将上述步骤（1）获得的细胞按0.5‑2×104/cm2的密度接种到培养瓶中，置于37℃、饱和湿度、5%的CO2培养箱中进行原代细胞培养，细胞培养到80‑90%融合时，用trypLETM消化，按分种率1：2‑‑1：10接种到新培养瓶中培养，经过数次传代，间充质干细胞得到纯化，可以将细胞作为原代传代细胞库冻存到液氮中长期保存。