合成四环素偶联抗原的方法

摘要

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种合成四环素偶联抗原的方法。本发明合成四环素偶联抗原的方法，包括下述的步骤：a.四环素的衍生化；b.四环素与蛋白偶联；c.偶联抗原的纯化；d.偶联抗原的鉴定。本发明提供了一种能够高效合成四环素偶联抗原的方法，该合成方法过程简单，易于操作，无污染，合成率高，效价高，从而为检测四环素残留的免疫产品的开发和生产提高了效率，大大节约了成本，降低了免疫产品检测的费用和价格。

主权项

合成四环素偶联抗原的方法，包括下述的步骤：a. 四环素的衍生化 称取四环素，加入N，N‑二甲基甲酰胺溶解，得到溶液①；称取N，N‑羰基二咪唑，加入N，N‑二甲基甲酰胺溶解，得到溶液②；将溶液①缓慢滴加到溶液②中，于34‑39℃下搅拌衍生1‑5小时，得衍生化的四环素；b. 四环素与蛋白偶联称取牛血清白蛋白，加入PBS溶解，得到溶液③；将步骤a中衍生化好的四环素缓慢滴加到溶液③中，于34‑39℃搅拌反应3‑8小时，然后4℃放置过夜，得偶联的四环素；c. 偶联抗原的纯化 将步骤b中偶联好的四环素全抗原装入透析袋中，4℃下放置，用蒸馏水透析1‑3天，每隔4‑8小时换蒸馏水一次；d. 偶联抗原的鉴定采用间接Elisa方法，将纯化好的四环素偶联抗原用0.01M PBS梯度稀释，所述的稀释倍数为1：2000，1：4000，1：8000，1：16000，1：32000，1：64000包被酶标板，测定偶联抗原的活性及效价。