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一种金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下四个组织培养阶段：（1）种子无菌萌发形成原球茎：选择金线莲近成熟的蒴果，进行蒴果表面消毒灭菌处理后，将蒴果切开，取出种子均匀播种在无激素种子萌发培养基上，播种后的培养瓶置于温度20‑28℃、无光照条件下培养诱导种子萌发，培养时间30‑40天，使种子膨大、萌发形成白色或乳黄色的原球茎；所述无激素种子萌发培养基为：MS或N6基本培养基+土豆泥100‑150g/L+白糖20‑30g/L+琼脂或卡拉胶5.0‑8.0g/L，pH值为5.4‑5.8；（2）原球茎的增殖与小苗分化培养：将第（1）阶段获得的原球茎转入无激素增殖与分化培养基中，培养温度20‑28℃，光照强度1500‑2500lx，光照时间8‑12小时/天，培养时间60‑90天，使原球茎增殖并分化形成带叶和茎的芽或者具有叶、茎及胚根的无菌苗；所述的无激素增殖与分化培养基为：MS或N6基本培养基+土豆泥100‑200g/L+番茄汁50‑100g/L+蛋白胨1‑3g/L+白糖20‑30g/L+琼脂或卡拉胶5.0‑8.0g/L，pH值为5.4‑5.8；（3）无菌苗壮苗培养：将第（2）阶段获得的已分化的芽或无菌苗转移进行1‑2次的壮苗培养，每次壮苗培养由以下两个依次进行的培养周期组成：第一个培养周期：将无菌苗转入无激素壮苗培养基A中，培养时间30‑50天，培养温度20‑28℃，光照强度1500‑2500lx，光照时间8‑12小时/天；所述无激素壮苗培养基A为：MS或N6基本培养基+土豆泥100‑150g/L+蛋白胨1‑3g/L+活性炭0.5‑2.0g/L+白糖20‑30g/L+琼脂或卡拉胶5.0‑8.0g/L，pH值为5.4‑5.8；第二个培养周期：将无菌苗转入无激素壮苗培养基B中，培养时间30‑50天，培养温度20‑28℃，光照强度1500‑2500lx，光照时间8‑12小时/天；所述无激素壮苗培养基B为：MS或N6基本培养基+土豆泥50‑100g/L+香蕉泥100‑200g/L+活性炭0.5‑2.0g/L+白糖20‑30g/L+琼脂或卡拉胶5.0‑8.0g/L，pH值为5.4‑5.8；第1次壮苗培养结束后，选择具有2片以上叶片且株高2cm以上的无菌壮苗进入第（4）阶段的生根培养，其余的弃用或者接着进行第2次壮苗培养；第2次壮苗培养结束后，选择具有2片以上叶片且株高2cm以上的无菌壮苗进入第（4）阶段的生根培养；（4）生根培养：将第（3）阶段获得的无菌壮苗转入无激素生根培养基中，培养温度20‑28℃，光照强度1500‑2500lx，光照时间10‑14小时/天，培养时 间40‑60天；所述无激素生根培养基为：MS或N6基本培养基+香蕉泥100‑200g/L+土豆泥0‑50g/L+活性炭1‑2g/L+白糖20‑30g/L+琼脂或卡拉胶5.0‑8.0g/L，pH值为5.4‑5.8。 |
