用于修复神经损伤的水凝胶包裹慢病毒Lingo-1 RNAi复合物及其制备方法

摘要

本发明公开一种用于修复神经损伤的水凝胶包裹慢病毒Lingo-1 RNAi复合物，采用Lingo-1 RNAi联合水凝胶生物支架及释放的策略，RNAi干扰Lingo-1协同水凝胶促进脊髓损伤轴突再生，为脊髓损伤修复提供了新的治疗途径。本发明还公开了所述水凝胶包裹慢病毒Lingo-1 RNAi复合物的制备方法，所述方法操作方便，易于实现。同时，本发明又公开了所述水凝胶包裹慢病毒Lingo-1RNAi复合物在制备治疗脊髓损伤的药物中的应用。

主权项

一种用于修复神经损伤的水凝胶包裹慢病毒Lingo‑1RNAi复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）慢病毒Lingo‑1RNAi的构建；（2）水凝胶的制备：将水凝胶与去离子水在无菌条件下配制成质量比为20%～25%的混悬液，将混悬液置于2‑8℃至水凝胶充分溶解，过滤除菌，得水凝胶原液；（3）将步骤（1）构建的慢病毒Lingo‑1RNAi与步骤（2）制备的水凝胶原液在2～8℃以每毫升水凝胶原液中含1×107TU的慢病毒Lingo‑1RNAi的浓度混合，搅拌使其充分混合，得混合液；（4）取步骤（3）得到的混合液以200μL每孔加至24孔板，使其平铺孔底，放置于25℃～37℃培养箱温育3‑5min，取出后，孔底形成不透明薄胶状物，即得水凝胶包裹慢病毒Lingo‑1RNAi复合物；所述RNAi的核苷酸序列为：UCGAGAAAAAAAAGCACAACAUCGAAAUUGAAUCUCUUGAAUUCAAUUUCGAUGUUGUGCUUA；所述水凝胶为PluronicF‑127水凝胶。