快速获取鹅铁蛋白重链基因编码区序列及定量检测其表达的方法及其引物

摘要

本发明公开了一种快速获取铁蛋白重链基因编码区序列及定量检测其表达的方法及其引物，包括以下步骤：提取鹅组织总RNA并反转录；设计FTH编码区序列引物FTH-L（SEQ ID NO:1-2）和检测FTH表达规律的引物FTH-S（SEQ ID NO:3-4）；通过RT-PCR扩增，产物回收纯化，目的基因连接和转化，阳性菌落的筛选和测序，获取FTH编码区序列，测序鉴定荧光定量PCR引物。该技术成本低、效率高，只需一次克隆即可获得完整编码区序列；并可快速、准确检测鹅不同组织和不同发育时期样品中FTH的表达规律，为阐明鹅FTH结构和功能，以及鹅机体内铁代谢机制的研究奠定了理论基础。

主权项

一种快速获取鹅铁蛋白重链基因编码区序列的方法，其特征在于，根据GenBank上原鸡FTH基因的编码区序列设计并合成特异性引物FTH‑L，其序列为：上游引物：5’GTTCCTGCGT CAACAGTGCT TGGAC3’；下游引物：5’TTATTGGATG GAGGGCAGTA CACA3’（如SEQ ID NO:1‑2所示）；通过RT‑PCR扩增，PCR产物的回收纯化，目的基因的连接和转化，阳性菌落的筛选和测序，获取FTH基因全长编码区序列；PCR反应参数设置：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，30 cycles；72 ℃ 10 min。