利用蜜蜂SCHtp-1基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法

摘要

本发明涉及一种利用蜜蜂SCHtp-1基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，包括蜜蜂样本采集、蜜蜂头部RNA提取、蜜蜂头部cDNA合成、引物设计、qRT-PCR反应体系和条件，以及蜂王浆产量性能鉴别。本发明从分子生物学高度，针对蜂王浆生产受蜂群群势、蜜源、环境、气候等条件影响巨大的问题，提供了能够更科学、准确地鉴别蜂群的王浆产量性能优劣的荧光定量PCR方法，可以大大缩短蜂王浆生产性状考察周期，加快蜜蜂育种速度，降低蜂王浆生产性状考察的成本和育种成本，还能减轻田间蜂王浆产量性能考察的工作强度。

主权项

一种利用蜜蜂SCHtp‑1基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，其特征在于鉴别方法如下： （1）蜜蜂取样：从被考察蜂群中，每群分别采集30只哺育蜂；所述哺育蜂指蜂群中哺育幼虫的工蜂，即6－12日龄的工蜂；（2） 蜜蜂头部RNA提取及cDNA合成：提取所采集哺育蜂头部的RNA，反转录获得cDNA；（3）引物设计：设计合成的引物序列如下：Primer‑F：5’‑ caccagttccacctttaccaa‑3’Primer‑R：5’‑ cagtttctgcccattgttgat‑3’；（4）荧光定量PCR检测：以稀释后的蜜蜂头部cDNA为模板， 以Primer‑F和 Primer‑R为引物，进行荧光定量PCR；选用蜜蜂头部的GAPDH为内参基因，采用2‑△△ct 方法计算蜜蜂SCHtp‑1基因的表达量；在每个蜂群样本的每次qRT‑PCR反应中均重复多次，取多次重复的平均值为蜜蜂SCHtp‑1基因的最终表达量，最终表达量越高，则該蜂群的蜂王浆产量性能越好；所述2‑△△ct为蜜蜂SCHtp‑1基因的相对表达量，其中△△Ct = (Cttarget ‑CtGAPDH) treatment ‑ (Cttarget ‑CtGAPDH) control。