用于检测水仙花叶病毒和水仙黄条病毒的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种用于检测水仙花叶病毒和水仙黄条病毒的试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括：PCR Buffer、Mgcl2、dNTPs、反转录酶、RNA酶抑制因子、Taq DNA聚合酶、试剂A、试剂B、阳性对照和RNase-free ddH2O。本发明根据水仙花叶病毒、水仙黄条病毒基因序列设计特异性引物，利用一步法反转录聚合酶链式反应技术对水仙花叶病毒、水仙黄条病毒进行检测，不仅试剂盒制作方法简便，而且具有快速、准确、灵敏度高、特异性强的优点，可有效应用于口岸进出境水仙上水仙花叶病毒、水仙黄条病毒的快速检疫，也可用于农业生产上水仙花叶病毒、水仙黄条病毒的检测诊断、疫情监控及预警预报，应用前景广泛。

主权项

一种用于检测水仙花叶病毒和水仙黄条病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：1）PCR Buffer：10×；2）Mgcl2：25mmol/L；3）dNTPs：10mmol/L；4）反转录酶：5U/μL；5）RNA酶抑制因子：40U/μL；6）Taq DNA聚合酶：5U/μL；7）试剂A：10μmol/L，内含上游引物NMV‑f和下游引物NMV‑r，其中上游引物NMV‑f的序列为5’‑ACTCAGTCGCACCCGCTATG‑3’，下游引物NMV‑r的序列为5’‑GTGCTTCAATGGCGTACATGG‑3’；8）试剂B：10μmol/L，内含上游引物NYSV‑f和下游引物NYSV‑r，其中上游引物NYSV‑f的序列为5’‑GAAGCAAAGTGTCGCCAGTG‑3’，下游引物NYSV‑r的序列为5’‑CACGCCTAGAAGGTTGTGCAT‑3’；9）水仙花叶病毒、水仙黄条病毒的阳性对照样品；10）RNase‑free ddH2O。