真菌固态发酵生产脱落酸的方法

摘要

本发明公开了一种真菌固态发酵生产脱落酸的方法，具体步骤如下：筛选正诱变的灰葡萄孢霉菌为生产菌种，再通过活化和扩大形成平皿固态菌种，备用；发酵培养基制备；将制备的平皿固态菌种碾碎，均匀分散到灭菌后的培养浅盘当中进行周期性发酵培养；对发酵产物进行提纯即得天然脱落酸。与液态发酵法相比，本发明具有发酵水平高、投资小、染菌率低、无有机废液等优点。脱落酸的平均发酵水平可以达到2934mg/kg，即每千克培养基中含有2.934g脱落酸；这是现在已知的工业水平下达到的最高发酵水平。

主权项

一种真菌固态发酵生产脱落酸的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)菌种制备筛选正诱变的灰葡萄孢霉菌为生产菌种，再通过活化和扩大培养，形成平皿固态菌种，备用；(2)发酵培养基制备发酵培养基按照重量百分比的原料为：小米15‑25%、大米15‑25%、葡萄糖0.1‑2%、蔗糖0.1‑4%、蛋白胨1‑4%、CaCO3 0.5‑1.5%、Na2HPO4·12H2O 0.1‑0.5%、Ca(HO)2  0.5‑1.5%、MgSO4  0.01‑0.05%、提纯残留物0.5‑1%，其他成份为水；其中，提纯残留物是指发酵产物提取过程中分离浓缩得到的非脱落酸物质；发酵培养基的制作方法：将所有原料混合，加水拌匀，置于蒸饭柜中进行预热处理；将预热好的培养基打散，称量分装到培养浅盘中，每盘装取400‑800g培养基；将培养浅盘置于灭菌柜中，进行高压灭菌，备用；(3)生产接种将步骤（1）制备的平皿固态菌种碾碎，均匀分散到步骤（2）灭菌后的培养浅盘当中；每个培养浅盘使用2‑4个平皿菌种；接种重量为培养基的6‑10%；(4)发酵培养将已接种的培养浅盘移入发酵间，置于发酵培养装置中进行培养；培养模式如下：培养0‑48小时的平均温度为26.5‑28.5℃、平均通气量为5‑10L/100盘/天；培养48‑96小时的平均温度为26‑28℃、平均通气量为15‑20L/100盘/天；培养96‑216小时的平均温度为22‑24.5℃、平均通气量为40‑50L/100盘/天；培养216‑288小时的平均温度为25.5‑26.5℃、平均通气量为10‑20L/100盘/天；(5)天然脱落酸提纯：对步骤（4）的发酵产物进行提纯即得天然脱落酸。