筛选高亲和力抗体的方法

摘要

本发明公开了用于生产抗体的方法，包括步骤：a)提供多个杂交瘤细胞，每种细胞都表达抗体，b)在不同的温度和不同的抗体浓度下，通过表面等离振子共振确定所述抗体与各抗原结合的时间依赖量，c)基于等式(II)至(XIII)，用b)中确定的时间依赖量至少计算热力学参数(i)标准缔合结合熵式(A)，(ii)标准解离结合熵式(B)，(iii)标准结合熵(ΔS°)，(iv)自由标准结合焓(ΔG°)，(v)标准解离自由结合焓式(C)，(vi)标准缔合自由结合焓式(D)，(vii)-TΔS°，(viii)解离速率常数kd，(ix)平衡结合常数KD，和(x)缔合速率常数Ka，d)选择生产这样的抗体的杂交瘤细胞，所述抗体具有至少两种下列的：i)低于10J/K＊mol的标准缔合结合熵，ii)100J/mol＊K或更高的绝对标准解离结合熵，iii)100J/mol＊K或更高的绝对标准结合熵，e)在适合所述抗体表达的条件下，通过培养所述选定的细胞生产抗体，并从细胞或/和培养基中回收所述抗体。

主权项

1.从多个抗体中选择抗体的方法，所述方法包括下列步骤：-基于抗原的分子量优化表面等离振子共振测定中的信号应答，从而在测定的温度范围内保持R_max值恒定，-实施动力学筛选步骤，包括基于表面等离振子共振测定根据通式（I）计算抗原复合体稳定性（I）抗原复合体稳定性=(1-[BL(RU)–SL(RU)/BL(RU)])BL表示设置在抗原注射终点不久前的结合晚期参照点，SL表示设置在复合体解离期终点不久前的稳定性晚期参照点，-选择具有大于95%复合体稳定性的抗体，-在17°C、21°C、25°C、29°C、33°C和37°C，通过表面等离振子共振确定温度依赖性动力学数据，-基于等式（II）至（XIII），(II)ΔG°=ΔH°-T*ΔS°(III)ΔG°=-R*T*lnK_D(IV)lnK_D=-1/T*(ΔH°/R)/斜率-(ΔS°/R)/截距(v)R*T*lnK_D=ΔH°_T0-T*ΔS°_T0+ΔC°_p(T-T₀)-T*ΔC_p°ln(T/T₀)/斜率/截距(VIII)k_a=A*e^-Ea/R*T(IX)lnk_a=lnA/截距-(1/T*Ea/R)/斜率/斜率/截距(XII)k_d=A*e^-Ea/R*T(XIII)lnk_d=lnA/截距-(l/T*Ea/R)/斜率计算过渡态热力学性质，-基于温度依赖性增加的抗原复合体缔合速率常数K_a[1/Ms]，以及保持的或降低的抗原复合体解离速率常数k_d[1/s]选择抗体。