发明名称 |
一种蜡蚧菌海藻糖酶纯化的方法 |
摘要 |
本发明涉及真菌酶的分离纯化方法。更具体地,本发明涉及一种蜡蚧菌海藻糖酶的分离纯化方法。所述分离纯化方法包括硫酸铵沉淀、DEAE-52阴离子交换柱层析、SephadexG-100凝胶过滤层析。该方法将蜡蚧轮枝菌在优化后的产酶培养基中发酵培养,采用硫酸铵沉淀、DEAE-52阴离子交换柱层析、SephadexG-100凝胶过滤层析等步骤获得了凝胶电泳均一的轮枝菌海藻糖酶。本发明的分离纯化方法具有特异性高,工艺简单,易于控制;蛋白质不易失活,纯化效果好,回收率高,成本低等优点,具有很好的推广应用价值。 |
申请公布号 |
CN103409390A |
申请公布日期 |
2013.11.27 |
申请号 |
CN201310295877.3 |
申请日期 |
2013.07.13 |
申请人 |
福建农林大学 |
发明人 |
邱君志;曹丽萍;涂洁;李小霞;孟丽雪;张以盼;董冬;何肖云;郭庆丰;姚灵丹 |
分类号 |
C12N9/24(2006.01)I;C12R1/645(2006.01)N |
主分类号 |
C12N9/24(2006.01)I |
代理机构 |
福州元创专利商标代理有限公司 35100 |
代理人 |
蔡学俊 |
主权项 |
一种蜡蚧轮枝菌海藻糖酶分离纯化的方法,其特征在于包含以下步骤:(a) 粗酶液的制备: 将蜡蚧轮枝菌L. lecanii FJ28发酵液,至少每天都测定发酵液的酶活性,当发酵液中海藻糖酶活性达最高时取发酵液离心,上清液用真空抽滤,收集滤液;向滤液中加入固体硫酸铵至饱和度为70% wt,4℃静置过夜;再次离心收集沉淀,用0.02mol/L磷酸盐缓冲液溶解沉淀;离心溶解液除去不溶物体,上清液装于透析袋,经0.02mol/L磷酸盐缓冲液透析后,再用聚乙二醇 PEG20000浓缩得到粗酶液;(b) 粗酶液经过PEG20000浓缩后,用0.02mol/L磷酸盐缓冲液平衡过夜,上样于充分平衡后的DEAE‑52 阴离子交换层析柱,再用含0‑1mol/LNaCl的磷酸盐缓冲液进行盐离子梯度洗脱,即可根据DEAE‑52图上的峰值收集具有酶活的洗脱液;(c) 用0.02mol/L磷酸盐缓冲液充分平衡Sephadex G‑100凝胶层析柱,将b中所得样用PEG20000浓缩上于其中后,再用0.02mol/L磷酸盐缓冲液的缓冲液进行洗脱;收集收集具有酶活的洗脱液;步骤 (a)、(b)、(c)中缓冲液为磷酸盐缓冲液为0.02mol/L pH=6.5,含0‑1mol/LNaCl的磷酸盐缓冲液为0.02mol/L pH=6.5。 |
地址 |
350002 福建省福州市仓山区建新镇金山学区 |