用于快速筛选和鉴定有效shRNA的载体及其筛选和鉴定方法

摘要

本发明提供了一种快速筛选和鉴定有效shRNA真核表达载体，将如下结构构建至同一个真核表达载体上：1)由polIII型启动子调控的shRNA表达框结构，即polIII型启动子+shRNA插入位点；2)由CMV启动子调控的荧光蛋白表达框，并在荧光蛋白基因后面紧跟一个多克隆位点(MCS)；3)由SV40启动子调控的荧光蛋白表达框，该荧光蛋白的荧光颜色与第2)中的荧光蛋白的荧光颜色不同。本发明还提供了用上述载体筛选或验证有效shRNA的方案，利用此载体和方法筛选和鉴定有效shRNA，不需做RT-PCR或Western-blot检测，快速、简单、方便、成本低廉，特别适合于从多个预先设计的备选shRNA中筛选有效shRNA。

主权项

用于快速筛选和鉴定有效shRNA的真核表达载体，其特征在于，将如下结构构建至同一个真核表达载体上：1）由polIII型启动子调控的shRNA表达框结构，即 polIII型启动子+shRNA插入位点；2）由CMV启动子调控的荧光蛋白表达框，并在荧光蛋白基因后面紧跟一个多克隆位点（MCS）；3）由SV40启动子调控的荧光蛋白表达框，该荧光蛋白的荧光颜色与第2）中的荧光蛋白的荧光颜色不同；其中，所述CMV启动子调控的荧光蛋白表达框、polIII型启动子调控的shRNA表达框和SV40启动子调控的荧光蛋白表达框按顺时针方向依次排列在真核表达载体上；所述CMV启动子的启动方向为逆时针方向，polIII型启动子和SV40启动子的启动方向为顺时针方向；所述polIII型启动子为hU6、mU6、hH1或h7SK启动子；所述真核载体还包括Kan或者Amp抗性筛选标记；所述真核表达载体为SEQ NO 1 所示。