发明名称 |
一种利用皮肤来源的祖细胞制备组织工程脊髓的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种利用皮肤来源的祖细胞制备组织工程脊髓的方法,包括如下步骤:1)、分离SKPs,传代得SKPs原代细胞;2)、将分离得到的SKPs原代细胞移入扩增培养基中进行扩增;3)、制备组织工程脊髓,将组织工程脊髓材料饱和水溶液,滴加到含Neurotrophin-3(NT3)、维甲酸和Neuregulin的生理盐水溶液中;将扩增后的SKPs,以脑源性神经营养素腺病毒表达载体感染,将细胞接种到工程脊髓材料材料上,进行培养。本发明的方法中,组织工程脊髓可有效地促进细胞增殖,其向神经元和少突胶质细胞分化的比例为4.8%和1.5%左右,远远高于单纯支架材料的1.8%和0.5%。 |
申请公布号 |
CN103396984A |
申请公布日期 |
2013.11.20 |
申请号 |
CN201310315106.6 |
申请日期 |
2013.07.25 |
申请人 |
宗兆文;陈思旭 |
发明人 |
宗兆文;陈思旭 |
分类号 |
C12N5/071(2010.01)I;A61L27/38(2006.01)I |
主分类号 |
C12N5/071(2010.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
一种利用SKPs制备组织工程脊髓的方法,包括以下步骤:1)、分离SKPs将皮肤样品酒精消毒后,胰酶消化,然后将真皮组织剪成细胞片并碎吹打成细胞悬液,过滤后接种于含DMEM培养液的培养瓶中,2h后,将悬浮的细胞离心后转移到SKPs生长培养基中,培养约7天后,可见悬浮克隆样生长的细胞SKPs;2)、SKPs快速扩增将分离得到的SKPs原代细胞移入扩增培养基中进行扩增,所述扩增培养基中含有FGF2 40‑60ng/ml和PDGF 40‑70ng/ml。3)、制备组织工程脊髓将组织工程脊髓材料饱和水溶液,滴加到含NT3、维甲酸和Neuregulin的生理盐水溶液中,静置,然后吸走培养皿中的液体,将组织工程脊髓材料经过梯度酒精脱水后,真空干燥;将扩增后的SKPs,以脑源性神经营养素(brain derived neurotrophic factor,BDNF)腺病毒表达载体感染,12h后收集细胞接种到上述的工程脊髓材料材料上,加入培养基培养。 |
地址 |
400042 重庆市渝中区大坪长江支路10号 |