同源重组方法和克隆方法以及试剂盒

摘要

本发明提供可以选择性地同源重组目标基因的方法、以及利用该方法得到的重组DNA分子。同源重组方法，该方法使用PCR产物和线性化载体，所述PCR产物包含两末端具有扩增用引物序列P1和P2的靶基因序列；所述线性化载体具有包含与该PCR产物的扩增用引物序列P1和P2同源的核苷酸序列的同源重组区VP1和VP2，在VP1的末端侧具有包含与P1内侧的部分序列T1同源的核苷酸序列的同源重组区VT1、和/或在VP2的末端侧具有包含与P2内侧的部分序列T2同源的核苷酸序列的同源重组区VT2(T1和T2的至少一方具有靶基因所特有的核苷酸序列)，该方法包括：使上述PCR产物参与同源重组反应，以将其插入上述载体中，由此得到在载体中特异性地插入有目标PCR产物的重组DNA分子。克隆方法，该方法利用上述同源重组方法，制备在载体中特异性地插入有目标PCR产物的重组DNA分子，之后扩增所得的重组DNA分子。

主权项

同源重组方法，该方法使用PCR产物和线性化载体，所述PCR产物包含两末端具有扩增用引物序列P1和P2的靶基因序列；所述线性化载体具有包含与该PCR产物的扩增用引物序列P1和P2同源的核苷酸序列的同源重组区VP1和VP2，并且，在VP1的末端侧具有包含与P1内侧的部分序列T1同源的核苷酸序列的同源重组区VT1、和/或在VP2的末端侧具有包含与P2内侧的部分序列T2同源的核苷酸序列的同源重组区VT2，其中T1和T2的至少一方具有靶基因所特有的核苷酸序列，该方法包括：使上述PCR产物参与同源重组反应，以将其插入上述载体中，由此得到在载体中特异性地插入有目标PCR产物的重组DNA分子。