发明名称 | 小鼠肝脏原代细胞分离方法 | ||
摘要 | 本发明属于细胞技术领域,特别涉及一种小鼠肝脏原代细胞分离方法,以进一步培养,用于模拟肥胖和非肥胖状态下的NAFLD,来检测BBR的治疗效果。本发明提供了一种简单、经济、快速的小鼠原代肝脏细胞分离方法,适用于一般实验室的小鼠原代肝脏细胞分离以及进一步培养,为后续实验提供基础。以本发明所获得的小鼠原代肝脏细胞进行进一步培养,建立体外细胞模型,进行验证BBR在治疗非肥胖小鼠的脂肪肝方面的功效,获得了良好的效果,为验证BBR在治疗肥胖与非肥胖NAFLD方面的功效起到了积极作用,为治疗NAFLD的药物的研制提供了基础条件。 | ||
申请公布号 | CN103396983A | 申请公布日期 | 2013.11.20 |
申请号 | CN201310303792.5 | 申请日期 | 2013.07.18 |
申请人 | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 | 发明人 | 宁光;李博;李小英;洪洁;王卫庆;杨颖;张志国 |
分类号 | C12N5/071(2010.01)I | 主分类号 | C12N5/071(2010.01)I |
代理机构 | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人 | 韩国辉 |
主权项 | 一种小鼠肝脏原代细胞分离方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)配制Ⅳ型胶原酶:称取0.0125gⅣ型胶原酶加入盛有20mL的Hanks培养液中,配制成终浓度为0.05%的Ⅳ型胶原酶,0.45μM滤器过滤,放入37℃水浴锅中温育;(2)取一只准备好的小鼠麻醉,肌注肝素抗凝;(3)固定,剪开皮毛,用棉签将肠胃向右拨开,露出门静脉,用细弯镊游离门静脉,垫入细线,上下各1根;(4)用10mL注射器吸取已预热的无钙D‑Hanks,连接至套管针;(5)向门静脉中插入套管针,拔出一点针头,结扎细线固定针;(6)推入无钙D‑Hanks6‑9mL,同时用棉签轻拍肝脏,至肝脏变白;(7)剪下肝脏,放入10cm平皿中,用10mL注射器吸取胶原酶,缓缓推入,同时用棉签轻拍肝脏,观察肝脏的变化,重复4‑5次,待肝脏包膜破裂,用镊子撕扯包膜;(8)将撕碎的肝脏用100目筛网滤入50mL离心管中,500rpm,4℃离心5min;(9)弃上清,加入1×PBS20mL重悬,混匀离心,此步骤重复3次;(10)加入原代细胞培养液hepatocyte medium,接种至12孔细胞板中培养;(11)24h后换高糖DMEM培液。 | ||
地址 | 200025 上海市卢湾区瑞金二路197号 |