水产养殖环境沉积物中孔雀石绿及其代谢物含量检测方法

摘要

本发明涉及一种水产养殖环境沉积物中孔雀石绿及其代谢物含量检测方法，属于环境质量安全检测技术领域。本发明将沉积物经乙腈超声萃取后的样品液由多壁碳纳米管固相萃取柱净化后，利用液相色谱串联质谱仪进行定性定量分析。本发明方法操作方便，重现性较好，定性准确且回收率较高，能够快速分析水产养殖环境沉积物中的孔雀石绿及其代谢物。

主权项

水产养殖环境沉积物中孔雀石绿及其代谢物含量检测方法，其特征在于该方法包括超声溶剂萃取、固相萃取富集净化和液相色谱—质谱检测这三个步骤，其中：所述的超声溶剂萃取，按下面步骤操作：准确称量2.0～10.0g均匀沉积物样品加入到聚丙烯离心管中，准确加入50ng氘代孔雀石绿、50ng氘代隐色孔雀石绿和10～12mL色谱纯乙腈；加塞后涡旋振荡混匀2min，在40KHz超声波作用下35～45℃温度萃取8min，然后将萃取样品在转速5000 rpm下离心6 min，上清液转移至25mL比色管中；残渣中再加入12mL乙腈后重复前面的提取和离心操作一次，合并上清液并用乙腈定容至25mL，即得到样品液；所述的固相萃取富集净化，按下面步骤操作：在3mL聚乙烯固相萃取小柱底部先放置一层孔径20μm石英砂滤芯筛板，加入20～60mg多壁碳纳米管材料，上面再放置一层20μm滤芯筛板，通过调节上层滤芯筛板向下压紧程度来控制多壁碳纳米管填料厚度在0.5～0.6cm；制作完成的多壁碳纳米管固相萃取柱先用5mL甲醇和5mL纯水润洗活化，弃去流出液；然后准确移取5mL样品液到固相萃取柱中，控制流速在1.0mL/min，接收流出液；再向固相萃取柱中加入5%甲酸乙腈2～4mL进行淋洗，合并流出液；所述的液相色谱—质谱检测，按下面步骤操作：流出液经45～55℃下氮气吹干后，用2mL初始组成流动相充分溶解；取1mL样液，经0.22μm有机相微孔滤膜过滤到样品小瓶中，在已设定的液相色谱—质谱条件下进行检测，进行定性定量分析；色谱条件：C18色谱柱柱温40℃，进样量10μL，流动相组成为用甲酸调pH至4.5的5mmol/L乙酸铵缓冲溶液和乙腈，流速0.3 mL/min；梯度洗脱条件：0～3.0min内乙酸铵缓冲溶液体积浓度由50%线性降至5%；3.0～5.0min内乙酸铵缓冲溶液体积浓度由5%线性升至50%；质谱条件：电喷雾正离子模式，毛细管电压3.50 kv，离子源温度120℃，脱溶剂气温度380℃，脱溶剂气流量600 L/h，锥孔气流量50 L/h，多反应监测扫描模式；孔雀石绿定量离子对329.3/313.2, 定性离子对329.3/208.1，隐色孔雀石绿定量离子对331.2/316.2, 定性离子对331.2/239.2；绘制标准工作曲线，以内标法定量计算孔雀石绿和隐色孔雀石绿含量。