荧光染料标记小鼠胚胎干细胞的方法及其应用

摘要

本发明公开一种荧光染料标记小鼠胚胎干细胞的方法及其应用，步骤：用0.1％明胶包被细胞培养皿并在室温下放置至少30分钟，将小鼠胚胎干细胞传代到包被后的培养皿中，并且用条件培养基进行培养，无滋养层培养至少3代；再将无滋养层培养的小鼠胚胎干细胞用无机荧光染料和有机荧光染料标记待用；最后将荧光染料标记的小鼠胚胎干细胞应用于体内识别肿瘤细胞。本发明用荧光染料标记小鼠胚胎干细胞，制备出具有良好的生物安全性、强的荧光强度、较持久的抗荧光淬灭性、以及较长的发射波长等特性的胚胎干细胞探针，可以用于识别体内肿瘤细胞，为临床上应用胚胎干细胞技术治疗肿瘤提出了创新点和科研方向。

主权项

一种荧光染料标记小鼠胚胎干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，采用条件培养基用无滋养层培养方法培养小鼠胚胎干细胞：用质量百分比为0.1%的明胶包被细胞培养皿并在室温下放置至少30分钟，将小鼠胚胎干细胞传代到包被后的培养皿中，并且用条件培养基进行培养，无滋养层培养至少3代；步骤二，选取荧光染料标记小鼠胚胎干细胞；所述荧光染料标记小鼠胚胎干细胞，是指选用有机染料或无机染料标记小鼠胚胎干细胞；所述无机荧光染料包括量子点，荧光磁性纳米粒子，二氧化硅包覆的荧光纳米粒子中一种；所述无机荧光染料标记小鼠胚胎干细胞的方法为：将无滋养层培养的小鼠胚胎干细胞和量子点共同孵育2个小时，之后弃掉多余的染料，并用pH7.4的PBS缓冲液洗涤细胞三次，再消化细胞并用pH7.4的PBS缓冲液重悬至单细胞悬液待用；所述有机荧光染料标记小鼠胚胎干细胞的方法为：将无滋养层培养的小鼠胚胎干细胞消化为单细胞与DiR染料共同孵育30分钟，然后在4℃1000rpm离心弃掉多余的染料，并用pH7.4的PBS缓冲液洗涤细胞两次，用pH7.4的PBS缓冲液重悬至单细胞悬液待用。