发明名称 |
一种基于桥式PCR检测DNA羟甲基化的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种基于桥式PCR的DNA羟甲基化的高通量芯片检测方法,首先将不同扩增DNA羟甲基化位点的正方向引物固定到芯片或微球。其次,用β-葡萄糖基转移酶将DNA上所有5hmC进行糖基化,再用MspI酶进行酶切,发生羟甲基化的CCGG不能够被切开,未发生羟甲基化的CCGG能够被切开。然后,再以酶切后基因组DNA为模板与芯片进行杂交,并进行在片桥式PCR:CCGG位点发生羟甲基化的因不能被酶切,而能够进行扩增;反之,CCGG位点未发生羟甲基化的因能被酶切,而不能进行扩增。最后,根据芯片不同矩阵点荧光的有无,即可判断出基因组DNA不同位置的CCGG是否发生了羟甲基化。有益效果是:实现了不同DNA羟甲基化位点的平行性检测,检测结果具有高通量和高灵敏的特点。 |
申请公布号 |
CN103388024A |
申请公布日期 |
2013.11.13 |
申请号 |
CN201310279835.0 |
申请日期 |
2013.07.04 |
申请人 |
徐州医学院 |
发明人 |
潘志强;曹君利;郝凌云;杨曦;李燕强;尹;张松;唐倩 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;G01N21/64(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
南京经纬专利商标代理有限公司 32200 |
代理人 |
杨海军 |
主权项 |
一种基于桥式PCR检测DNA羟甲基化的方法,其特征是:首先将不同扩增DNA羟甲基化位点的正反向引物固定到芯片或微球;其次,用β‑葡萄糖基转移酶将DNA上所有5hmC进行糖基化,再用MspI酶进行酶切,发生羟甲基化的CCGG不能够被切开,未发生羟甲基化的CCGG能够被切开;然后,再以酶切后基因组DNA为模板与芯片进行杂交,并进行在片桥式PCR: CCGG位点发生羟甲基化的因不能被酶切,而能够进行扩增;反之,CCGG位点未发生羟甲基化的因能被酶切,而不能进行扩增;最后,根据芯片不同矩阵点荧光的有无,判断出基因组DNA不同位置的CCGG是否发生了羟甲基化; 其中所述反向引物长为27bp:近5’端7个bp为T,近3’端20bp与每个CCGG位点的CGG后,包括CGG所在序列反向互补;反向扩增引物序列为CCGG被MspI酶切后CGG+的反向互补序列;正向引物长为20bp,且正向扩增引物序列为待检测CCGG 位点近5’端的125 bp处一段序列;相邻微阵列点间的距离设为80um。 |
地址 |
221000 江苏省徐州市铜山路209号 |