基于微阵列芯片的通用多重聚合酶链式反应的实现方法

摘要

一种生物医学技术领域的基于微阵列芯片的通用多重聚合酶链式反应的实现方法，使用微阵列芯片点样系统将若干对引物分别点至微阵列芯片的若干个亲水性微孔中，然后将PCR组分溶液以提拉方式或引流方式加入到亲水性微孔中；将微阵列芯片点样系统的微阵列芯片放置于原位PCR仪上或放入充有矿物油的离心管中进行热循环扩增，最后将微阵列芯片置于离心管中或直接离心收集PCR产物作为二次增扩模板；将若干对引物对二次增扩模板进行二次扩增以便于检测，从而实现通用多重聚合酶链式反应；采用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺电泳、毛细管电泳或DNA芯片读出多重聚合酶链式反应结果。

主权项

一种基于微阵列芯片的通用多重聚合酶链式反应的实现方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步、使用微阵列芯片点样系统将若干对引物分别点至微阵列芯片的若干个亲水性微孔中，然后将PCR组分溶液以提拉方式或引流方式加入到亲水性微孔中；第二步、在微阵列芯片表面覆盖一层矿物油或者将整个芯片浸入到矿物油中；第三步、将微阵列芯片点样系统的微阵列芯片放置于原位PCR仪上或放入充有矿物油的离心管中进行热循环扩增，最后将微阵列芯片置于离心管中或直接离心收集PCR产物作为二次增扩模板；第四步、将若干对引物对二次增扩模板进行二次扩增以便于检测，从而实现通用多重聚合酶链式反应；第五步、采用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺电泳、毛细管电泳或DNA芯片读出多重聚合酶链式反应结果；其中，第一步中所述的将若干对引物分别点至微阵列芯片的若干个亲水性微孔中，具体是指：在每一个亲水性微孔中点入不相同的引物对，并在每一个亲水性微孔中加入交联试剂；第一步中所述的提拉方式是指：将微阵列芯片浸入PCR组分溶液后立即以均匀的速度提出PCR组分溶液的液面；第一步中所述的引流方式是指：将蘸有少量PCR组分溶液的薄片掠过微阵列芯片的表面，通过微阵列芯片的表面亲水性将PCR组分溶液加载于亲水性微孔中；所述的交联试剂为：重量百分比为0.1％‑1％的壳聚糖溶解于pH为4.5‑6.0的乙酸水溶液；第一步和第四步中所述的引物包含通用引物和特异性引物。