骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，特别涉及细胞的培养方法，骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，具体为将骨髓来源单细胞悬液在体外用含M-CSF的PRMI1640完全培养基培养，在加入培养基培养前，还包括骨髓来源单细胞悬液的预处理步骤，具体为：将所述骨髓来源单细胞悬液用滤孔为40～75μm的滤器过滤，取过滤液进行培养；本实施例中培养的巨噬细胞分化成熟所需的时间与原来相比缩短了1～2天；在细胞悬液的处理中，经过滤的细胞与未过滤的细胞相比，骨髓来源祖细胞的纯度提高；未过滤的骨髓来源祖细胞的纯度仅约为17％～20％，经过滤后，骨髓来源祖细胞的纯度提升到30％-40％。

主权项

骨髓来源的巨噬细胞的体外诱导培养方法，其为将骨髓来源单个核细胞悬液在体外用培养基培养，其特征在于，具体包括以下步骤：     A 骨髓来源的细胞混合液的制备     用注射器吸取含有质量分数为0.05%的吐温‑20的pH7.4的PBS缓冲液插入离体动物股骨两端的软骨处冲出股骨内的骨髓，收集骨髓来源的细胞混合液；     B 单个核细胞悬液的制备     将步骤A所得的收集骨髓来源的细胞混合液混悬，得骨髓来源的单个核细胞悬液，用滤孔为40~75μm的滤器过滤，将过滤液在1000~1500rmp/min条件下离心5~10分钟，去上清液，用含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基重悬细胞，制备细胞重悬液；     C 第一阶段细胞培养     将步骤B所得细胞重悬液调节成浓度为1‑2×106个/mL，置于培养箱中37℃、5﹪孵育24~30小时后，吸弃上清，另加入所述含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基，再培养48小时；     D 第二阶段培养在第一阶段细胞培养完成后，不超过24小时对培养的细胞进行换液，另培养3~4日，得分化成熟的巨噬细胞；所述含巨噬细胞集落刺激因子的PRMI1640完全培养基中含巨噬细胞集落刺激因子的浓度为20ng/ml。