鲍鱼内脏多糖替代血清在细胞培养基中的应用

摘要

本发明涉及一种鲍鱼内脏多糖代替血清在细胞培养基中的应用，在细胞培养基中该鲍鱼内脏多糖可以代替部分血清，且能维持细胞的正常生长，无毒副作用。

主权项

一种鲍鱼多糖替代血清在细胞培养基中的应用，该鲍鱼内脏多糖组成成分包括鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖，所述的鲍鱼内脏多糖主链结构中含有→3)‑β‑D‑GlcpA‑(1→4)‑α‑L‑Rhap‑(3SO4)‑(1→，→3)‑β‑D‑GlcpA‑(1→4)‑α‑L‑Rhap‑(2SO4)‑(1→两种结构单元，两种单元数量比例2:1；所述的鲍鱼内脏多糖在细胞培养基中替代部分血清；所述的鲍鱼内脏多糖的制备方法：将干鲍鱼内脏磨粉，加入0.1M pH6.0乙酸钠缓冲溶液、0.1倍样品质量的木瓜蛋白酶、5mM EDTA溶液和5mM半胱氨酸溶液，于60℃水浴下搅拌反应24h之后，反应混合物离心获得上清液，即鲍鱼内脏酶解液，随后向上清液中加入终浓度为10％的阴离子表面活性剂溶液，室温下放置24小时后，离心，弃上清，沉淀溶解于3MNaCl和乙醇以体积比为100：15的混合溶液中，再加入2倍体积的95％乙醇溶液，4℃放置24小时，离心，沉淀用80％和95％乙醇洗2‑3次，最后将沉淀于60℃干燥2小时，蒸馏水溶解，用透析袋透析并脱盐，浓缩，冻干，得鲍鱼内脏粗多糖；随后鲍鱼内脏粗多糖经过DEAE‑52阴离子交换层析和S‑200凝胶过滤层析进行分离纯化，得到的物质即为所述鲍鱼内脏多糖。