甜菊双苷转化为莱鲍迪苷B的方法

摘要

本发明公开了一种甜菊双苷转化为莱鲍迪苷B的方法，属于食品化工领域，其以甜菊双苷为原料，以蔗糖为糖源，在黑曲酶Ⅲ的催化下转化为莱鲍迪苷B。本发明以甜菊双苷为原料得到莱鲍迪苷B的转化率≥70%，固形物中莱鲍迪苷B含量至少可达60%，进一步分离纯化后可达80%，甚至可＞90%，RB口感无异味，可单独作为甜味剂使用，以此方法生产RB成本低，易放大，适用于工业生产。

主权项

甜菊双苷转化为莱鲍迪苷B的方法，其特征在于：其以甜菊双苷为原料，以蔗糖为糖源，在黑曲酶Ⅲ的催化下转化为莱鲍迪苷B；所述黑曲酶Ⅲ是从黑曲霉菌（Aspergillus niger）CICC 40417（中国工业微生物菌种保藏管理中心 保藏编号：40417）发酵诱导得到的一种特异性糖基转移酶，它是利用下述方法得到的：（1）挑取黑曲霉菌CICC 40417单克隆，接种至含 25ml BMGY培养液的 250ml 摇瓶中，26‑30℃ ，200‑300rpm 培养至 OD600=2‑6；将 25ml 培养基接种至含 1L BMGY培养液的 2‑4L 摇瓶中，26‑30 ℃剧烈振荡，至对数生长期；（2）用灭菌离心管，室温 2000‑3000g 离心 5min 收集细胞，去除上清，用BMMY溶液重悬细胞至 OD600=1.0，分装培养基至几个 3‑4L 隔板摇瓶，用 2 层灭菌纱布或干酪包布盖住，放入摇床 26‑30℃继续培养；（3）每 24 小时，加甲醇至 0.4‑0.6%浓度，直至到达最佳诱导时间；室温条件下，2000‑3000g 离心 5min 收集细胞；保留上清酶液，置于 4 ℃预冷浓缩；使用葡聚糖凝胶按分子量对粗酶分段，其中分子量在68‑73kD的酶即为黑曲酶III，存于‑80 ℃备用。