| 主权项 |
一种注射用黄芪皂苷中单体化合物的分离方法，其特征在于该方法包括如下步骤：取黄芪药材20kg，切片，加体积浓度为70%的含水乙醇8倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇体积含量至65%进行沉淀和过滤，滤液调节至pH9.0后沉淀过滤，滤液调节至pH7.0左右，按原料药/水为1.5/1的量加水混合后，在5℃低温下沉淀后过滤，滤液用大孔吸附树脂D‑101吸附，以30%浓度的含水乙醇洗脱至洗脱液几乎无色除杂，再以75%浓度的含水乙醇解吸附洗脱并收集，将除去乙醇后的解吸附浓缩溶液调节pH至10.0后，用经水饱和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮‑乙醚（1:1）进行沉淀，分离沉淀物为供注射剂用的黄芪皂苷；取黄芪皂苷100g先用水1000ml分散，用分析纯的乙酸乙酯萃取3次，每次500ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物15g；萃取后的水相用分析纯的正丁醇萃取3次，每次500ml，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物65g；将乙酸乙酯萃取物15g经正相硅胶柱层析分离，体积比为95:5→65:35的氯仿‑甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为15:1和4:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A，依次接下来的1.2倍柱体积、0.8倍柱体积、0.8倍柱体积、1.2倍柱体积、2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B、组份C、组份D、组份E和组份F，回收溶剂后，分别得到组份A：0.1g、组份B：1.4g、组份C：2.8g、组份D：4.0g、组份E：1.5g、组份F：1.8g6个组份；将正丁醇萃取物65g经正相硅胶柱层析分离，体积比为85:15→30:70的氯仿‑甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10:1和3:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前3倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份G，依次接下来的2倍柱体积、1倍柱体积、1倍柱体积、3倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份H、组份I、组份J和组份K，回收溶剂后,得到组份G：1.4g、组份H：3.2g、组份I：9.5g、组份J：12.0g、组份K：2.5g5个组份；将组份A 0.1g经正相硅胶柱层析分离，用分析纯的氯仿洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为10:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前4.8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份A‑1，依次接下来的1.2倍柱体积、6倍柱体积的洗脱液斑点 相近，分别收集为组份A‑2和组份A‑3，将其中组分A‑2回收溶剂后，得到单体化合物10mg，经结构鉴定为：10‑甲氧基美迪紫檀素；将组份B 1.4g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为95:5→65:35的氯仿‑甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份B‑1，依次接下来的2倍柱体积、4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份B‑2和组份B‑3，将其中组分B‑2回收溶剂后，再用120ml甲醇重结晶得到单体化合物95mg，经结构鉴定为：胡萝卜苷；将组份C 2.8g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为100:0→60:40的氯仿‑甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为8倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前2.4倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C‑1，依次接下来的2.4倍柱体积、3.2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C‑2和组份C‑3，回收溶剂后,得到组份C‑1：0.3g、组份C‑2：0.5g、组份C‑3：1.2g3个组份；将组份C‑1 0.3g经Sephadex LH‑20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为6:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前4.5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C‑1‑1，依次接下来的1.5倍柱体积、9倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C‑1‑2和组份C‑1‑3，将其中组分C‑1‑2回收溶剂后，得到单体化合物50mg，经结构鉴定为：乙酰黄芪皂苷Ⅰ；将组份C‑2 0.5g经Sephadex LH‑20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前7.5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C‑2‑1，依次接下来的3倍柱体积、4.5倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C‑2‑2和组份C‑2‑3，将其中组分C‑2‑2回收溶剂后，得到单体化合物105mg，经结构鉴定为：2‑羟基‑3,4‑二甲氧基异黄烷‑7‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；将组份C‑3 1.2g经正相硅胶柱层析分离，以体积比为100:0→55:45的氯仿‑甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为5:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前3.6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份C‑3‑1，依次接下来的3倍柱体积、5.4 倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份C‑3‑2和组份C‑3‑3，将其中组分C‑3‑2回收溶剂后，得到单体化合物310mg，经结构鉴定为：9,10‑二甲氧基紫檀烷‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；将组份E 1.5g经甲醇50ml重结晶得到单体化合物800mg，经结构鉴定为：毛蕊异黄酮‑7‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；将组份F 1.8g经硅胶柱层析分离，以体积比为90:10→55:45的氯仿‑甲醇梯度洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为4:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前4.5倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份F‑1，依次接下来的1.5倍柱体积、4倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份F‑2和组份F‑3，将组分F‑2回收溶剂后,得到单体化合物750mg，经结构鉴定为：黄芪甲苷；将组份H 3.2g经甲醇100ml重结晶得到单体化合物1.8g，经结构鉴定为：芒柄花苷；将组份K 2.5g经Sephadex LH‑20凝胶柱层析分离，用分析纯的甲醇洗脱，洗脱液用量为10倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前6倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K‑1，接下来的4倍柱体积的洗脱液斑点相近，收集为组份K‑2，回收溶剂后,得到组份K‑1：1.1g、组份K‑2：0.8g2个组份；将组份K‑1 1.1g经反相C18硅胶柱层析分离，以体积比为15:85→85:15的甲醇‑水梯度洗脱，洗脱液用量为12倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前4.8倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K‑1‑1，依次接下来的1倍柱体积、6.2倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K‑1‑2和组份K‑1‑3，将组分K‑1‑2回收溶剂后,得到单体化合物95mg，经结构鉴定为：环黄芪苷E；将组份K‑2 0.8g经反相C18硅胶柱层析分离，以体积比为15:85→90:10的甲醇‑水梯度洗脱，洗脱液用量为15倍柱体积，在洗脱过程中，一边洗脱一边以每次0.1个柱体积的洗脱液进行正相硅胶薄层层析检查，以体积比为3:1的氯仿:甲醇为展开剂，结果显示，前5.2倍柱体积的洗脱液的斑点相近，收集为组份K‑2‑1，依次接下来的1.8倍柱体积、8倍柱体积的洗脱液斑点相近，分别收集为组份K‑2‑2和组份K‑2‑3，将组分K‑2‑2回收溶剂后,得到单体化合物70mg，经结构鉴定为：黄芪皂苷Ⅵ。 |
