牛微卫星标记组合及其应用

摘要

本发明公开了一种牛微卫星标记组合，其包括17个牛微卫星标记，同时提供了基于此17个微卫星标记的高效检测方法。这些标记多态性高、标记间不连锁并且片段大小间隔适当，易于同时检测。本发明在检测技术上加以改进，利用多标记复合扩增技术和荧光半自动微卫星分型方法，优化实验体系，建立了高通量、准确高效的17个牛微卫星标记复合扩增和基因分型方法。

主权项

用于检测牛微卫星标记组合的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)DNA提取：提取牛细胞DNA；(2)PCR扩增：扩增所述17个牛微卫星标记的特异目的片段；所述17个牛微卫星标记分为如下的4组分别进行复合扩增，并且采用不同颜色的荧光进行引物修饰：复合扩增组合标记荧光修饰组合1ETH10HEX ETH225HEX TGLA227FAM BM1818FAM TGLA126HEX组合2BM1824HEX INRA023FAM TGLA53FAM BM2113FAM TGLA122VIC组合3MM12HEX HEL9FAM INRA063HEX组合4SPS115FAM ILSTS006HEX ETH152FAM CSRM060FAM(3)基因分型：将以上组合1和组合2的扩增产物混合后进行检测，将组合3和组合4的扩增产物混合后进行检测；电泳分析所述标记的基因型；所述检测的具体条件为：将混合后的待检测样品用灭菌的去离子 水稀释10～20倍，取稀释后样品1.5μL，加入GeneScan‑500LIZ SizeStandard0.25μL，去离子甲酰胺9μL，混匀后瞬时离心，95℃变性4分钟，立刻放于冰盒中冷却3分钟，将变性后样品转入96孔样品板，进行毛细管电泳。