厚叶岩白菜组培苗低温保存方法

摘要

本发明涉及一种厚叶岩白菜组培苗低温保存方法，该方法是由厚叶岩白菜的外植体诱导出芽、继代两次培养、低温保存以及缓苗继代出新芽四个步骤完成。该方法简单易于操作，植物材料复苏快，生活力高，对于一般组培车间保存原种材料极为实用，能解决快繁生产急用。植物低温保存对于有优良性状的种质资源的保存也有极其重要的价值。

主权项

一种厚叶岩白菜组培苗低温保存方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将厚叶岩白菜新鲜叶片用0.5‑1g/L洗洁精或洗衣粉水溶液仔细擦洗表面，再用自来水流动冲洗10min，然后将叶片在超净工作台上用浓度为75％酒精表面消毒30s，将0.1％升汞中加入吐温‑802‑3滴灭菌5‑12min，再用含有0.2％的Na2S2O3无菌水冲洗3‑5次；b、将步骤a消毒后的厚叶岩白菜叶片切成0.8‑1.2cm2的小块作为外植体，接种于固体培养基上进行愈伤诱导，其中固体培养基为B5+3％蔗糖+1.0mg/L NAA+1.0mg/L6‑BA+100mg/L水解酪蛋白+0.2％聚乙烯吡咯烷酮+100mg/L Na2S2O3；c、将步骤b中形成的愈伤组织，转入增殖固体培养基B5+1.0mg/LNAA+1.0mg/LIBA+0.05mg/L6‑BA诱导出芽，继代两次；d、将步骤c中诱导出芽的厚叶岩白菜无菌苗移入冷藏固体培养基B5+0.1mg/L NAA+0.5mg/L6‑BA+0.01mg/L IBA+25‑45g/L葡萄糖+10‑40mg/L甘露醇+5.5g/L琼脂中；e、将步骤d中长势强壮的单苗，移入50毫升冷藏固体培养基底部，放置海尔SC‑279GA透明门立式冷藏柜进行低温冷藏，由冷藏柜里的照明灯，每天16小时照射，8‑12个月后，在温度20℃下进行组培苗的缓苗继代，30天后长出新芽即可。