酿酒酵母展示亚油酸异构酶催化合成共轭亚油酸的方法

摘要

本发明公开了一种酿酒酵母展示亚油酸异构酶催化合成共轭亚油酸的方法，将含有重组质粒的酿酒酵母K601，接种到YPG培养基中，诱导培养，收集菌体，洗涤，得到酿酒酵母展示亚油酸异构酶催；然后将得到的酿酒酵母展示亚油酸异构酶加入到含有亚油酸的缓冲液中，振荡反应。本发明将亚油酸异构酶展示表达在酿酒酵母细胞外表面，直接与底物亚油酸接触，提高共轭亚油酸的转化效率，降低生产成本。

主权项

一种酿酒酵母展示亚油酸异构酶催化合成共轭亚油酸的方法，包括：将酿酒酵母展示亚油酸异构酶加入到含有亚油酸的pH6.0‑7.0的缓冲液中，振荡反应；所述的酿酒酵母展示亚油酸异构酶通过如下方法制备：将携带重组质粒的酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）K601，接种到YPG培养基中，诱导培养，离心收集菌体，洗涤，得到酿酒酵母展示亚油酸异构酶；所述的重组质粒包括原始载体pYES2和插入原始载体pYES2的目的基因，所述目的基因由依次连接的Mfα1信号肽基因、亚油酸异构酶基因、酵母α‑凝集素C端锚定区基因组成，所述的Mfα1信号肽基因插入到原始载体pYES2中GAL1启动子的下游；所述的亚油酸异构酶基因碱基序列如SEQ ID NO:1所示；所述的酵母α‑凝集素C端锚定区基因碱基序列如SEQ ID NO:2所示；所述的Mfα1信号肽基因碱基序列如SEQ ID NO:3所示；所述的缓冲液为磷酸缓冲液；所述的缓冲液中亚油酸的浓度为3mg/ml；所述的振荡反应的温度为28‑32℃；所述的振荡反应时间为6～80h。