化学法-酶法制备1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸的方法

摘要

本发明涉及一种以化学法-酶法相结合的过程来制备1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸(DXP)的方法。该方法以缩水甘油为底物，以无机磷酸盐为磷酸化试剂，水为溶剂，用化学法合成D，L-甘油3-磷酸或L-甘油3-磷酸；再加入过氧化氢酶和L-甘油磷酸氧化酶，丙酮酸钠，二价金属离子，辅羧酶，磷酸三糖异构化酶和1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶及酶保护剂，反应得到含DXP的混合物；再将混合物纯化后得到DXP。本发明中采用D，L-缩水甘油或L-缩水甘油为原料，以磷酸氢二钠为磷酸化试剂，这些商品化试剂的使用解决了以往酶法合成DXP中原料昂贵且不稳定的问题。该方法仅经过一步反应就得到目标分子DXP，制备过程简单、快速；离子交换法纯化后目标分子产率可达60％以上，纯度可达90％以上。

主权项

化学法‑酶法制备1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤取148mg Na2HPO4于15mL离心管中，加入800μl超纯水使之溶解，再加入0.5mmol rac‑缩水甘油或0.25mmol R‑缩水甘油，100℃水浴，反应3h；反应结束后，待离心管冷却至室温后，调pH至7.5，加入过氧化氢酶 180units，L‑甘油磷酸氧化酶 3units，丙酮酸钠55mg，磷酸三糖异构化酶25units，辅羧酶2mM，MgCl2 10mM，β‑巯基乙醇 5mM，1‑脱氧‑D‑木酮糖‑5‑磷酸合酶500μg，总反应体积为1mL，37℃反应12小时；反应过程中，用纸色谱法检测反应进行的程度，介质为实验室常用定性滤纸，展开剂为1M乙酸铵︰99%乙醇︰EDTA‑Na2=70︰30︰1（v/v/v），显色剂为10%的硫酸乙二胺盐水溶液；反应完成后，4℃下阴离子交换剂纯化产物1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸，流动相为0.05‑0.65M甲酸铵溶液，pH8.0，流速2.5mL/min，低浓度到高浓度线性梯度洗脱，纸色谱检测；将含有1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸部分合并后用阳离子交换剂脱盐，收集洗脱液减压浓缩得到油状物质，即得1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸产品，低温保存；所述阴离子交换剂采用DEAE Sephadex A‑25，阳离子交换剂采用H型的Dowex 50w×8 树脂。