ATRP法构建以PGMA为骨架的高性能阳离子基因载体

摘要

本发明公开了属于非病毒基因载体技术领域的一种以ATRP法构建一系列以PGMA(聚甲基丙烯酸甘油酯)为骨架，低毒且高效的阳离子基因载体。该ATRP法聚合反应平稳，易于调控，并可根据需要制备出多种不同分子量的、窄分子量分布的高性能阳离子基因载体。制得的阳离子基因载体储存稳定性好，并且在Hepg2、C6、Cos7、HEK293等细胞中具有高于金标PEI的转染效率，使用方法简单，具有商业化潜力。

主权项

一种线性的以PGEA为骨架的阳离子基因载体的制备方法，其特征在于，其具体制备步骤为：1）0‑60℃无氧条件下，将2,2‑联吡啶、1,1,4,7,10,10‑六甲基三乙烯四胺、五甲基二乙烯三胺、4,4‑联吡啶中的一种或几种共0.08g‑0.26g，0.1g‑0.2g五甲基二乙烯三胺，5g‑10g四氢呋喃，6g‑12gGMA，0.033g‑0.15gCuBr混合，各组分添加顺序为：先将GMA溶于四氢呋喃，然后加入上述0.1g‑0.2g五甲基二乙烯三胺，再加入上述2,2‑联吡啶、1,1,4,7,10,10‑六甲基三乙烯四胺、五甲基二乙烯三胺、4,4‑联吡啶中的一种或几种共0.08g‑0.26g，最后加入CuBr引发活性可控自由基聚合，或者先将GMA溶于四氢呋喃，然后加入上述0.1g‑0.2g五甲基二乙烯三胺，再加入CuBr，最后加入上述2,2‑联吡啶、1,1,4,7,10,10‑六甲基三乙烯四胺、五甲基二乙烯三胺、4,4‑联吡啶中的一种或几种共0.08g‑0.26g引发活性可控自由基聚合；聚合反应时间为1‑9h，反应完成后加入水或者甲醇，或者暴露在空气中，使引发体系失活和终止聚合，然后用乙醚或者甲醇沉淀直到形貌变为固体，放入真空干燥箱中除去乙醚或者甲醇，所得产物为线性PGMA；2）0‑60℃无氧条件下，将0.2g‑0.5g步骤1）得到的线性PGMA溶于4g‑10g四氢呋喃或N，N‑二甲基甲酰胺中，加入2g‑4g醇胺和1g‑2g三乙胺，开环反应72‑168h；然后用乙醚沉淀直到产物形貌为固体，放入真空干燥箱中除去乙醚；然后将产物溶于水中，加水量与产物的比例为100‑300ml/g；产物溶解后放入截留分子量为2500‑4500Mw的透析袋中，在去离子水中透析3‑6h；最后将透析袋中的产物冷冻干燥直至除去所有水分即得到线性的以PGEA为骨架的阳离子基因载体。