一种大环糊精的制备方法

摘要

一种大环糊精的制备方法，属于食品工业技术领域。本发明从土豆淀粉中提取得到直链淀粉；然后用4-α-糖基转移酶作用直链淀粉生产大环糊精，并对制备的大环糊精进行了初步纯化及鉴定。本发明制备的大环糊精经鉴定聚合度范围为18-55之间，在国内首次制备得到了大环糊精，并且为大环糊精在工业中应用提供了技术依据。

主权项

一种大环糊精的制备方法，其特征在于，以土豆直链淀粉为底物，经4‑α‑糖基转移酶作用、复合酶综合处理得到聚合度范围为18‑55的大环糊精，步骤为：1)土豆直链淀粉的提取：称取10.0g土豆淀粉，加入少量无水乙醇浸润，加入370mL的0.5mol/L氢氧化钠溶液，并置于沸水中加热30min，溶液分散均匀后冷却，低速离心除去不溶物，用2mol/L的盐酸调节pH至中性，加入200mL体积比为3∶1的正丁醇‑异戊醇的混合液，在沸水中水浴20‑30min，使溶液清澈透明，无结团状，冷却至室温，于2‑4℃的冰箱中放置24h，取出，进行如下操作：以6000转/min离心20min，将沉淀物全部转移至120mL的正丁醇与水的体积比为1∶9的正丁醇水溶液中，然后置于沸水浴中搅拌直至溶液分散透明，再逐渐冷却至室温，放入2‑4℃的冰箱中24h，取出，离心，将得到的沉淀物重复所述操作共3次后，用无水乙醇浸泡5‑6次，并于室温下真空干燥得到土豆直链淀粉；2)大环糊精的制备：称取土豆直链淀粉4g，加入90％的二甲亚砜100mL，沸水浴中加热使其溶解；向该淀粉体系中加入pH 7.5，0.05mol/L Tris‑HCl缓冲溶液30mL，并调节溶液pH为7.5；加入40U/mL的4‑α‑糖基转移酶纯酶液4mL，于75℃下反应8h，沸水浴中加热20min终止反应；4℃、10000转/min离心10min后收集反应液，向反应液中加入30U/g淀粉的β‑淀粉酶去除未反应的直链淀粉，30℃反应4h后沸水浴加热10min终止反应；离心去除沉淀后再加入100U/mL的糖化酶和30U/mL的脱支酶各2mL，50℃反应6h后沸水浴加热10min终止反应，4℃、10000转/min离心10min后收集上清，加入无水乙醇使得乙醇质量浓度达到60％，10000转/min离心10min收集沉淀，将沉淀冻干即得经过初步纯化的大环糊精；3)产物的鉴定：用高效阴离子色谱HPAEC对大环糊精样品进行鉴定，操作如下：称取0.01g大环糊精样品，用超纯水溶解至1mL制成10mg/mL的样品溶液，上样10μL，采用的色谱条件是：Carbo PacTM PA‑200 column 3*250mm；柱温为30℃；流速为0.5mL/min；检测器采用电化学检测器；洗脱条件采用醋酸钠梯度洗脱法，程序如下：0‑5min醋酸钠浓度达到70m mol/L，氢氧化钠浓度达到96.5m mol/L，5‑45min醋酸钠浓度达到320m mol/L，氢氧化钠浓度达到72.5m mol/L；在此梯度洗脱程序下，大环糊精得到有效分离，经与标准大环糊精进行对比，制备得到大环糊精的聚合度范围为18‑55。