一种提高喹乐霉素产量的发酵方法

摘要

一种提高喹乐霉素产量的发酵方法，采用一株已保藏与微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5514的直立标桩菌(Stigmatella eracta)LY-122发酵生产喹乐霉素，通过对直立标桩菌LY-122发酵培养基和发酵条件的改良，并结合添加前体的方法，使喹乐霉素的产量比目前已报道的产量高12-14倍，且产量稳定，基本维持在15mg/l左右，纯度可达85-90%；本发明主要使用一些价格低廉的花生饼粉、葡萄糖和玉米浆等作为发酵培养基，同时在发酵过程中不需要加入价格昂贵的XAD-16大孔吸附树脂，降低了工艺成本；在提取工艺中，采用常见的离心、萃取、大孔树脂柱层析和结晶等方法，更适合大规模生产。

主权项

一种提高喹乐霉素产量的发酵方法，其特征在于：采用已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 5514，分类命名为直立标桩菌(Stigmatella eracta) LY‑122的微生物进行发酵，其具体步骤为：（1）斜面固体培养将直立标桩菌(Stigmatella eracta) LY‑122接种在固体斜面培养基上，25～35℃培养2~7天，得到斜面固体培养的菌种，备用；所述的固体斜面培养基配方为：每1000 ml培养基，加入蛋白胨 1.0～5.0g、葡萄糖1.0～5.0g和琼脂 17.0g，余量为水；（2）摇瓶种子培养取上述步骤（1）所制备的斜面固体培养的菌种，加入无菌水制成菌悬液，无菌水的加入量按照一环菌种加入3—5ml；将菌悬液接种于液体种子培养基中，接种量为液体种子培养基体积的2～10%，培养温度25～35℃，搅拌速度100～200 r/min， pH 7.0～7.2，培养时间2～5 天，得到摇瓶种子液，备用； 所述的液体种子培养基配方为：每1000 ml培养基，加入玉米淀粉0.5～5.0g、葡萄糖1.0～10.0g、酵母粉0.5～5.0g、氯化钙 0.5～2.0g和七水硫酸镁 0.5～2.0g，余量为水，pH 7.0～7.2；（3）发酵罐培养将上述步骤（2）培养好的摇瓶种子液接种于发酵培养基中，接种量为发酵培养基体积的2～10%，培养温度25～35℃，搅拌速度120～300 r/min，每分钟通入发酵液的空气体积与发酵液的体积比为1：2～1：10，pH 7.0～7.2，培养时间5～10 天，其中，在发酵培养的第三天分别添加已除菌的乙酸钠水溶液、丙酮酸水溶液和甘氨酸水溶液，使其在发酵培养基中终浓度分别达到1.0～10mg/l、1.0～10 ml/l和1.0～10mg/l，然后继续培养，即可得含有喹乐霉素的发酵液；所述的发酵培养基配方如下：每1000 ml培养基，加入花生饼粉1.0～10.0g、葡萄糖5～15.0g、玉米浆1.0～5.0g、大豆蛋白胨1.0～5.0g、氯化钙0.5～2.0g、硫酸镁 0.5～2.0g和磷酸二氢钾0.5～2.0g，余量为水， pH 7.0～7.2；（4）喹乐霉素的提取采用离心、萃取、大孔树脂柱层析和结晶的方法，从上述步骤（3）所得到的含有喹乐霉素的发酵液中提取喹乐霉素。