一种阿拉瑞林的固液相合成法

摘要

本发明涉及阿拉瑞林的一种固液结合的合成方法。主要解决现有合成方法存在的收率低、成本高、反应条件苛刻、污染大的技术问题。本发明主要合成步骤：1）以脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯树脂为起始树脂采用芴甲氧羰基固相合成法逐一偶联每一个保护氨基酸，合成得到侧链全保护的肽链树脂；2）对侧链全保护的肽链树脂进行切割，得到全保护的肽链片段pGluP-9；3）对全保护的肽链片段pGluP-9进行C端乙胺化，得到阿拉瑞林的全保护片段；4）对阿拉瑞林的全保护片段切割除去侧链保护基，得到阿拉瑞林粗品肽。本发明具备大规模化生产能力，操作简易、工艺稳定、生产成本低，总收率超过40%。

主权项

一种阿拉瑞林的固液相合成法，其特征在于，包括如下步骤：1）步骤1）包括：①取脯氨酸‑2氯‑三苯甲基‑氯树脂用二氯甲烷浸泡，使树脂充分溶胀，抽干，以N,N‑二甲基甲酰胺作溶剂，加入芴甲氧羰基（2,2,4,6,7‑五甲基‑2H‑苯并呋喃‑5‑磺酰基）精氨酸、N‑甲基吗啉或二异丙基乙胺，用O‑苯并三唑‑N,N,N,N‑四甲基脲鎓六氟磷酸盐/1‑羟基苯并三唑、O‑(苯并三唑‑1‑氧)‑N,N,N,N‑四甲基脲鎓六氟硼酸盐/1‑羟基苯并三唑、O‑(7‑偶氮苯并三氮唑‑1‑氧)‑N,N,N,N‑四甲基脲鎓六氟磷酸盐/1‑羟基‑7‑偶氮苯并三唑中的一种混合物为缩合剂，反应0.5‑2小时，茚三酮法检测反应终点，抽干，用N,N‑二甲基甲酰胺洗涤3‑5次，抽干，获得芴甲氧羰基‑（2,2,4,6,7‑五甲基‑2H‑苯并呋喃‑5‑磺酰基）精氨酸‑脯氨酸‑2氯‑三苯甲基‑氯树脂；②在步骤①获得的树脂中，加入脱帽试剂，反应10‑30分钟，抽干，用N,N‑二甲基甲酰胺洗涤5‑10次，抽干，以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，加入具有芴甲氧羰基保护的氨基酸、N‑甲基吗啉或二异丙基乙胺，以及用O‑苯并三唑‑N,N,N,N‑四甲基脲鎓六氟磷酸盐/1‑羟基苯并三唑、O‑(苯并三唑‑1‑氧)‑N,N,N,N‑四甲基脲鎓六氟硼酸盐/1‑羟基苯并三唑、O‑(7‑偶氮苯并三氮唑‑1‑氧)‑N,N,N,N‑四甲基脲鎓六氟磷酸盐/1‑羟基‑7‑偶氮苯并三唑中的一种混合物为缩合剂，反应0.5‑2小时，检测反应终点，抽干，用N,N‑二甲基甲酰胺洗涤3‑5次，抽干，然后再加入脱保护试剂，脱保护反应，再加入具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸，如此反复，直至连完最后一个焦谷氨酸，用N,N‑二甲基甲酰胺洗涤3‑5次，再用甲醇和二氯甲烷交替洗涤3次，最后加甲醇收缩树脂，抽干，真空干燥，获得焦谷氨酸‑(三苯甲基)组氨酸‑（叔丁氧羰基）色氨酸‑（叔丁氧基）丝氨酸‑（叔丁氧基）酪氨酸‑D‑丙氨酸‑亮氨酸‑（2,2,4,6,7‑五甲基‑2H‑苯并呋喃‑5‑磺酰基）精氨酸‑脯氨酸‑2氯‑三苯甲基‑氯树脂；所说的具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸，依次包括：芴甲氧羰基亮氨酸，芴甲氧羰基‑D‑丙氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧基酪氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧基丝氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧羰基色氨酸，芴甲氧羰基三苯甲基组氨酸；2）在侧链全保护的肽链树脂加入切肽试剂，反应1‑3小时，抽滤滤掉树脂颗粒，收集滤液，减压蒸馏除去溶剂，加水析出白色固体，抽干，真空干燥，获得全保护的肽链片段pGluP‑9；3）将全保护的肽链片段pGluP‑9溶于N,N‑二甲基甲酰胺溶液中，加入乙胺盐酸盐、二异丙基乙胺，用(苯并三唑‑1‑氧)‑三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐/1‑羟基苯并三唑、二异丙基碳二亚胺/1‑羟基苯并三唑、O‑苯并三唑‑N,N,N,N‑四甲基脲鎓六氟磷酸盐/ 1‑羟基苯并三唑中一种混合物为缩合剂，搅拌反应12‑24小时，乙胺盐酸盐的用量是肽链片段pGluP‑9摩尔数的1‑5倍，缩合剂的用量是肽链片段pGluP‑9摩尔数的1‑5倍，二异丙基乙胺的用量是肽链片段pGluP‑9摩尔数的3‑15倍，反应结束后，加柠檬酸饱和溶液，析出白色固体，抽干，真空干燥，获得阿拉瑞林的全保护片段；4）将阿拉瑞林的全保护片段中加入去保护试剂，去保护试剂选用体积比三氟乙酸:水: 三异丙基硅烷=95:2:3的混合试剂，或者是体积比为三氟乙酸:苯甲硫醚:苯酚:乙二硫醇:水=87.5:5:2.5:2.5:2.5的混合试剂，反应时间是1‑3小时，反应结束后，加乙醚沉淀，离心收集沉淀，再用乙醚洗涤3‑6次，真空干燥，获得阿拉瑞林粗品。