一种从湖泊沉积物样品中提取纯化总DNA的高效方法

摘要

本发明公开了从湖泊沉积物中快速提取总DNA的高效方法，包括以下步骤：(1)取0.3g-1.0g左右样品于装有若干颗2.5mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中，加入300-1000μL DNA提取缓冲液，再加入50-500μL重铬酸钾溶液，使用Vortex-2(Mobio Laboratories Inc)涡旋10s-1min，加入50-300μL SDS溶液，涡旋3min，65℃温育5-60min(2)加入50-200μL氯化钾溶液，上下剧烈颠倒混匀数次。本方法可快速高效提取沉积物土壤总DNA，同时满足去腐除臭的特殊效果，解决了富营养化水体沉积物提取DNA的技术难点，为土壤、淤泥、沉积物、污泥等环境样品宏基因组研究和各类基因扩增提供高纯度的DNA供试样品。

主权项

1.一种沉积物环境样品总DNA快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取0.3g-1.0g左右沉积物土样于装有三颗2.5mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中，300-1000μLDNA提取缓冲液(100mmol/L Tris-HCl，1.5mol/L NaCl，1％CTAB，pH 8.0)，再加入50-500μL重铬酸钾溶液(0.05mol/L-3mol/L)，使用Vortex-2(Mobio Laboratories Inc)涡旋10s-1min，加入50-300μLSDS溶液(5％-20％)，涡旋3min，65℃温育5-60min；(2)加入50-200μL氯化钾溶液(0.05mol/L-5mol/L)，上下剧烈颠倒混匀数次，12000r/min离心2min；(3)取上清1000μL于2mL离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，12000r/min离心5min；(4)取上清900μL于1.5mL离心管中，加入0.6倍体积的异丙醇，冰浴10min，12000r/min离心5min；(5)弃上清，用70％的酒精洗沉淀，自然干燥或冷冻干燥；(6)50μLTE溶解沉淀。